人食管平滑肌細(xì)胞

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱(chēng) 人食管平滑肌細(xì)胞

組織來(lái)源 食管組織
種屬 人

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

培養(yǎng)信息：

方法簡(jiǎn)介：實(shí)驗(yàn)室分離的人食管平滑肌細(xì)胞采用胰蛋白酶 - 膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：實(shí)驗(yàn)室分離的人食管平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品名稱(chēng)：人食管平滑肌細(xì)胞

組織來(lái)源：食管組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：包被條件

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)最佳

消化液：0.25%胰蛋白酶人食管平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介 ：

人食管平滑肌細(xì)胞分離自食管組織；食管可分為頸段、胸段和腹段，脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過(guò)膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，肌層上1/3段為骨骼肌，下1/3為平滑肌，中段為骨骼肌和平滑肌混合組成。其中，肌纖維的排列方式分為內(nèi)環(huán)形和外縱形兩層。食管的蠕動(dòng)是由食管平滑肌收縮嚴(yán)格控制，食管還有括約肌，位于環(huán)狀軟骨水平的，稱(chēng)為食管上括約??；位于食管下端，一部分在膈上，穿過(guò)膈孔，另一部分在膈下的高壓帶，稱(chēng)為食管下括約肌。食管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)：大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：

一、取材與分離

新鮮、無(wú)菌：組織離體越快越好，全程冰上操作。

去除雜質(zhì)：剔除脂肪、結(jié)締組織、血污，減少污染和消化干擾。

溫和消化：

控制酶濃度、溫度、時(shí)間

及時(shí)終止消化，避免細(xì)胞過(guò)度損傷

過(guò)篩過(guò)濾：去除組織塊，獲得單細(xì)胞懸液。

二、接種與培養(yǎng)

密度關(guān)鍵：原代細(xì)胞普遍怕稀，密度太低不貼壁、不長(zhǎng)。

完全貼壁后再換液：剛接種別亂動(dòng)。

專(zhuān)用培養(yǎng)基：

內(nèi)皮、上皮、平滑肌、神經(jīng)元等盡量用專(zhuān)用原代培養(yǎng)基

血清質(zhì)量影響極大，建議批次驗(yàn)證

CO?、濕度、溫度嚴(yán)格穩(wěn)定，避免頻繁開(kāi)關(guān)門(mén)。

三、傳代與凍存

不要等太滿(mǎn)：匯合度 70%–80% 就傳，不要等到堆積。

消化監(jiān)控：鏡下觀察細(xì)胞變圓、間隙變大立即終止。

凍存保護(hù)：

標(biāo)準(zhǔn)：90% 血清 + 10% DMSO

程序降溫，盡快轉(zhuǎn)入液氮

原代細(xì)胞凍存復(fù)蘇能力弱，盡量早凍、多凍。

四、污染與狀態(tài)判斷

一旦渾濁、pH 驟變、有顆粒：直接丟棄，不要救。

細(xì)胞狀態(tài)好：

形態(tài)均一、輪廓清晰

生長(zhǎng)均勻、無(wú)局部堆積

出現(xiàn)分化、拉長(zhǎng)、多核、空泡多：說(shuō)明老化 / 狀態(tài)差，不建議繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)后處理：

廢棄樣本處理：

細(xì)胞廢棄物消毒：實(shí)驗(yàn)后的培養(yǎng)基、細(xì)胞懸液需用含有效氯的消毒液處理30分鐘后再排放，培養(yǎng)瓶、吸管等耗材需高壓滅菌后丟棄。

動(dòng)物組織處理：剩余的動(dòng)物組織需放入專(zhuān)用的生物危害垃圾袋，由專(zhuān)業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行無(wú)害化處理，避免生物污染。

實(shí)驗(yàn)設(shè)備清潔：

超凈工作臺(tái)清潔：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用75%酒精擦拭臺(tái)面，打開(kāi)紫外燈照射30分鐘，關(guān)閉風(fēng)機(jī)。

培養(yǎng)箱定期清潔：每周用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱內(nèi)壁和隔板，每2周更換一次培養(yǎng)箱內(nèi)的水盤(pán)，避免滋生細(xì)菌。