檢驗原理
本試劑盒采用SYBR Green染料法實時熒光定量PCR技術，針對嗜熱鏈球菌基因組高度保守區(qū)域設計特異性引物，通過熒光信號實時監(jiān)測核酸擴增過程，實現(xiàn)定性及定量檢測。擴增過程中，熒光信號強度與PCR產物量成正比，通過標準曲線計算目標基因拷貝數。
產品名稱 | 嗜熱鏈球菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Streptococcus thermophilus Dye-based qPCR Kit |
產品規(guī)格 | 50T | 產品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產品貨號 | PR4398 |
產品特點
高靈敏度：可檢測低至10^2拷貝/μL的靶標核酸。
特異性強：引物經優(yōu)化設計，不與相近菌種核酸交叉反應。
即開即用：預混反應體系（含酶、dNTPs、緩沖液等），用戶僅需提供DNA模板。
質量控制：提供陽性對照（非活體DNA片段）和陰性對照，避免假陰性/假陽性干擾。
兼容性：適配主流熒光定量PCR儀（如ABI 7500、Bio-Rad CFX等）。
操作步驟
1. 樣本準備
食品/環(huán)境樣本：按微生物學標準預處理（如均質、增菌）。
DNA提取：采用柱式或磁珠法提取核酸，建議OD260/280比值1.8-2.0。
2. 試劑配制
解凍預混液（冰上操作），輕柔混勻后瞬時離心，避免氣泡。
反應體系（20 μL/孔）：
預混液 10 μL
引物混合液 2 μL
模板DNA 2 μL
RNase-free水 6 μL
3. PCR程序設置
預變性：95℃ 5 min
循環(huán)階段（40 cycles）：95℃ 10 s → 60℃ 30 s（熒光采集）
熔解曲線分析：60℃至95℃，每0.5℃遞增5 s
4. 數據分析
閾值循環(huán)數（Ct值）≤35判為陽性；
定量分析需使用標準品繪制標準曲線（10^2-10^7拷貝/μL梯度稀釋）。
注意事項
分區(qū)操作：模板添加與PCR產物分析需在不同區(qū)域進行，避免污染。
重復設置：建議技術重復≥3次，確保數據可靠性。
陰性對照：必須包含無模板對照（NTC）以排除試劑污染。
儲存與運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融（解凍后建議分裝）。
運輸條件：冰袋或干冰運輸。
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關鍵字： 嗜熱鏈球菌;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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