產(chǎn)品概述
本試劑盒采用探針法熒光定量RT-PCR技術(shù)，專用于口蹄疫病毒SAT3亞型的快速、高特異性定性檢測。其核心設(shè)計(jì)基于SAT3亞型VP1基因保守區(qū)域的特異性引物及分子信標(biāo)探針，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號(hào)實(shí)現(xiàn)病毒核酸的靈敏檢測，適用于臨床樣本、動(dòng)物疫病監(jiān)測及進(jìn)出口檢疫等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 | 口蹄疫病毒SAT3亞型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Foot-and-Mouth Disease Virus SAT3 Subtype Dye-based qRT-PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR4435 |
技術(shù)原理
探針法設(shè)計(jì)：探針結(jié)合目標(biāo)序列后，Taq酶在擴(kuò)增時(shí)降解探針，使熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，釋放熒光信號(hào)。相較于染料法（如SYBR Green），探針法特異性更強(qiáng)，可有效避免非特異性擴(kuò)增干擾。
靶標(biāo)基因：針對SAT3亞型VP1基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物及探針，可與其他血清型（O、A、C等）區(qū)分，確保檢測準(zhǔn)確性。
試劑盒組成
RT-PCR反應(yīng)液：含逆轉(zhuǎn)錄酶、dNTPs及緩沖體系。
酶混合液：Taq DNA聚合酶與逆轉(zhuǎn)錄酶預(yù)混物。
引物與探針：
正向引物（40 μM）
反向引物（40 μM）
分子信標(biāo)探針（40 μM，含熒光報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)）
陰性/陽性對照：用于質(zhì)控。
說明書及儲(chǔ)存管。
操作步驟
反應(yīng)體系配制（25 μL）：
模板RNA：10 μL
RT-PCR反應(yīng)液：12.79 μL
酶混合液：1 μL
正向/反向引物：各0.6 μL
分子信標(biāo)探針：0.01 μL
擴(kuò)增程序：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 20分鐘
預(yù)變性：95℃ 5分鐘
擴(kuò)增循環(huán)（40次）：95℃ 15秒 → 55℃ 30秒（熒光采集）
結(jié)果判讀
陽性：Ct值≤35，且擴(kuò)增曲線呈典型S型。
陰性：無擴(kuò)增曲線或Ct值＞38。
灰區(qū)：35＜Ct值≤38，建議復(fù)測。
性能參數(shù)
靈敏度：可檢測低至10拷貝/μL的病毒RNA。
特異性：不與口蹄疫其他血清型或常見動(dòng)物病原體交叉反應(yīng)。
穩(wěn)定性：批內(nèi)/批間變異系數(shù)＜5%。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
保存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫干冰運(yùn)輸，確保試劑活性。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)需在BSL-2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，避免氣溶膠污染。
模板提取建議使用無RNase耗材，防止RNA降解。
擴(kuò)增結(jié)束后需立即分析數(shù)據(jù)，避免熒光信號(hào)衰減。
預(yù)期用途
本產(chǎn)品僅用于獸醫(yī)診斷及科研，不適用于臨床治療決策。
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關(guān)鍵字： 口蹄疫病毒SAT3亞型;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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