檢驗(yàn)原理

靶標(biāo)基因：甲型流感病毒（Influenza A Virus）保守的M基因片段及H10N7亞型特異的HA/NA基因片段。

方法學(xué)：

采用TaqMan探針?lè)ǎㄈ玖戏ǎ?，配合特異性引物與熒光探針。

通過(guò)一步法RT-PCR擴(kuò)增，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)病毒RNA的定性及定量檢測(cè)。

適用范圍

樣本類(lèi)型：

禽類(lèi)咽喉/泄殖腔拭子、組織勻漿液、雞胚尿囊液、環(huán)境樣本（需經(jīng)核酸提?。?/span>

應(yīng)用場(chǎng)景：

禽類(lèi)H10N7亞型流感疫情監(jiān)測(cè)、活禽市場(chǎng)篩查、實(shí)驗(yàn)室病原診斷。

試劑盒組分

| 組分名稱(chēng) | 規(guī)格（96測(cè)試） |

| RT-PCR反應(yīng)液 | 1.2 mL × 2管 |

| H10N7特異性引物探針混合液 | 150 μL × 1管 |

| RT-PCR酶混合液 | 100 μL × 1管 |

| 陽(yáng)性對(duì)照（H10N7 RNA） | 50 μL × 1管 |

| 陰性對(duì)照（無(wú)核酸水） | 1 mL × 1管 |

| RNase-Free純水 | 1 mL × 1管 |

檢測(cè)靈敏度與特異性

靈敏度：≤ 100 copies/μL（95%檢出率）

特異性：

可特異性檢出H10N7亞型，不與H1-H9、H11-H16亞型及常見(jiàn)禽病原體（如NDV、IBV等）交叉反應(yīng)。

操作步驟

1. 樣本前處理

樣本需經(jīng)病毒RNA提取試劑盒（如柱式法）純化，建議使用配套核酸提取系統(tǒng)。

2. PCR反應(yīng)體系配制

| 組分 | 體積（μL/反應(yīng)） |

| RT-PCR反應(yīng)液 | 10.0 |

| 引物探針混合液 | 2.0 |

| RT-PCR酶混合液 | 0.5 |

| 模板RNA | 2.0 |

| RNase-Free水 | 補(bǔ)至20 μL |

3. 擴(kuò)增程序設(shè)置

| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) | 信號(hào)采集 |

| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 15 min | 1 | 否 |

| 預(yù)變性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |

| 擴(kuò)增 | 95℃ | 15 sec | 40 | 是 |

| | 60℃ | 45 sec | | |

熒光通道選擇：

FAM通道：H10N7靶標(biāo)基因

VIC/HEX通道：內(nèi)標(biāo)（可選配）

結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)

| 結(jié)果類(lèi)型 | CT值范圍 | 曲線(xiàn)特征 |

| 陽(yáng)性 | CT ≤ 38.0 | S型擴(kuò)增曲線(xiàn)，閾值清晰 |

| 可疑 | 38.0 < CT < 40.0 | 重復(fù)檢測(cè)確認(rèn) |

| 陰性 | CT ≥ 40.0 或未檢出 | 無(wú)擴(kuò)增曲線(xiàn) |

有效性要求：

陽(yáng)性對(duì)照：CT ≤ 35.0

陰性對(duì)照：無(wú)擴(kuò)增（CT = Undetermined）

注意事項(xiàng)

生物安全：

操作需在BSL-2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，穿戴防護(hù)裝備，廢棄物需121℃高壓滅菌處理。

防污染：

分裝試劑，嚴(yán)格區(qū)分核酸提取區(qū)、PCR配制區(qū)、擴(kuò)增區(qū)。

質(zhì)量控制：

每批次檢測(cè)需包含陰/陽(yáng)性對(duì)照。

局限性：

陽(yáng)性結(jié)果需結(jié)合流行病學(xué)及臨床癥狀綜合判斷，必要時(shí)進(jìn)行病毒分離確證。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存（避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月）。

運(yùn)輸條件：干冰或冰袋（-15℃以下）。

聲明：

本說(shuō)明書(shū)為模擬文件，實(shí)際產(chǎn)品參數(shù)以具體試劑盒為準(zhǔn)。

本檢測(cè)僅用于科研及獸醫(yī)診斷，不可用于人類(lèi)臨床診斷。

公司正在出售的產(chǎn)品