葡萄糖氧化酶（GOD）活性檢測試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動物和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產(chǎn)生H2O2，是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一。
測定原理：
GOD催化葡萄糖氧化產(chǎn)生H?O?，過氧化物酶在有氧存在時催化H?O?分解產(chǎn)生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì)，顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關(guān)系。
試自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水。
樣品處理：
1. 組織處理：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿；8000g，4°C離心 10min，取上清，置冰上待測。
2. 細菌/細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照每500萬細菌/細胞加入1mL提取液，超聲波破碎（200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）。8000g，4°C離心10min，取上清，置冰上待測。
3. 血清（漿）：直接檢測。
活性計算：
1. 動物組織GOD活力的計算
（1）按蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每小時催化產(chǎn)生1μmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD（U/mg prot）=ΔA÷d÷ε×V反總÷(cpr×V樣本)÷T=1.111×ΔA÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每小時催化產(chǎn)生1μmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD（U/g 質(zhì)量）=ΔA÷d÷ε×V反總÷(W÷V提取×V樣本)÷T=1.111×ΔA÷W
（3）血清（漿）GOD活力的計算
單位的定義：每mL血清（漿）在反應(yīng)體系中每小時催化產(chǎn)生1μmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD（U/mL）=ΔA÷d÷ε×V反總÷V樣本÷T=1.111×ΔA
（4）細菌/細胞GOD活力的計算
單位的定義：每1萬細菌/細胞在反應(yīng)體系中每小時催化產(chǎn)生1μmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD（U/104 cell）=ΔA÷d÷ε×V反總÷(500÷V提取×V樣本)÷T=2.222×10-3×ΔA
V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣本：加入樣本體積，0.02mL；V提取，加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌/細胞數(shù)量，500萬；d：光徑，0.6cm；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺消光系數(shù)，7.5 mL/μmol/cm；T：反應(yīng)時間，2h。
注意事項：
1. 不同勻漿組織中GOD活力不一樣，做正式試驗之前請做1-2次預(yù)實驗，若A2-A1>0.8，則說明組織活力太高，建議用提取液稀釋成適當(dāng)濃度勻漿上清液，使A2-A1＜0.8，以提高檢測靈敏度。實驗過程中若出現(xiàn)A1>A2現(xiàn)象請將樣本用提取液稀釋成適當(dāng)濃度。
2. 本試劑盒默認(rèn)的反應(yīng)時間為2小時，該參數(shù)主要針對葡萄糖氧化酶（GOD）活性較低的樣品（常見情況）。若樣品中GOD活性較高，反應(yīng)可能在數(shù)分鐘內(nèi)完成，并伴隨顯著的顏色變化。此時，2小時的反應(yīng)時間將導(dǎo)致過度反應(yīng)，若出現(xiàn)該情況建議采取以下措施：對樣品進行適當(dāng)稀釋；或根據(jù)實際情況縮短反應(yīng)時間，并相應(yīng)調(diào)整計算公式中的時間參數(shù)。
3. 為了減少誤差，建議兩個人同時做此實驗，一個人進行反應(yīng)操作，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
關(guān)鍵字： 葡萄糖氧化酶（GOD）;葡萄糖氧化酶（GOD）檢測試劑盒;鄰聯(lián)茴香胺法;
伊勢久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測、病理檢測和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運行，其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅持以客戶為中心，致力于為中國的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。