本試劑盒采用特異性熒光PCR技術(shù)，專注檢測毛樣枝孢霉核酸，適配空氣沉降樣本、飼料、土壤、畜禽皮膚組織等樣本。毛樣枝孢霉是高污染性真菌，易引發(fā)過敏性病害與畜禽淺表真菌感染，常規(guī)真菌鏡檢鑒定難度大、準(zhǔn)確率低。本試劑盒通過基因精準(zhǔn)擴(kuò)增，特異性強(qiáng)、檢測靈敏度高，可快速完成樣本篩查與菌種鑒定，檢測流程標(biāo)準(zhǔn)化，適配基層檢測站點(diǎn)、養(yǎng)殖企業(yè)、食品加工企業(yè)的日常真菌監(jiān)測與病害溯源工作。
產(chǎn)品名稱 | 毛樣枝孢霉PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014022 |
英文名稱 | Cladosporium trichoidesPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
植物病害葉片真菌核酸提取，毛樣枝孢霉特有間隔區(qū)基因引物 PCR，電泳條帶鑒定致病霉菌。
單重 TaqMan 熒光 PCR，探針僅結(jié)合毛樣枝孢霉靶序列，排除卡氏枝孢霉交叉陽性。
植物組織粗提 PCR，葉片無需純化核酸，試劑盒緩沖液中和植物多酚抑制劑，穩(wěn)定擴(kuò)增靶基因。
?操作步驟?：
樣本制備：
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反應(yīng)體系配制（20 μL體系示例）：
預(yù)混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特異性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
補(bǔ)充無核酸酶水至終體積。
PCR擴(kuò)增程序：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）；
熔解曲線分析：60~95℃（可選，用于驗(yàn)證擴(kuò)增特異性）。
結(jié)果判讀：
陽性：Ct值≤35且熔解曲線峰單一；
陰性：Ct值≥40或無擴(kuò)增曲線；
可疑：35<Ct值<40，建議復(fù)測或結(jié)合熔解曲線分析。
?注意事項(xiàng)?：
所有耗材必須無核酸酶，吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸??；
陽性模板拷貝濃度高，開蓋操作輕柔，避免氣溶膠擴(kuò)散造成全域污染；
試劑融化后冰上放置不超過 2 h，用完立即放回 - 20℃；
廢棄 PCR 管、擴(kuò)增產(chǎn)物、實(shí)驗(yàn)廢液統(tǒng)一 121℃高壓滅菌后丟棄；
試劑盒僅用于動植物、水產(chǎn)、微生物疫病科研檢測，禁止人體臨床檢測；
移液器、操作臺定期紫外消毒，長期污染需更換全新試劑盒全套試劑。
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