?產(chǎn)品名稱:反芻獸考德里氏體PCR檢測試劑盒
英文名稱:Cowdria ruminantiumPCR
貨號:YS-P014062
分類:PCR檢測試劑盒
規(guī)格?:50T/盒
檢測原理:
靶向考德里氏體 16S rRNA 保守基因,牛羊血液白細(xì)胞 DNA 擴(kuò)增,檢測無形體類病原。
Taqman 熒光探針特異性結(jié)合菌株特有基因,qPCR 檢出血液內(nèi)微量胞內(nèi)菌核酸。
血液樣本裂解白細(xì)胞釋放菌體 DNA,屬內(nèi)特異性引物擴(kuò)增判定反芻獸考德里氏體。
實驗流程:
樣本制備:
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL,A260/A280比值1.8~2.0。
反應(yīng)體系配制(20 μL體系示例):
預(yù)混PCR Master Mix(含染料、dNTPs、Taq酶等)
特異性引物混合液
模板DNA(2~5 μL)
補(bǔ)充無核酸酶水至終體積。
PCR擴(kuò)增程序:
預(yù)變性:95℃ 5分鐘;
循環(huán)階段(40~45 cycles):95℃ 10秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號);
熔解曲線分析:60~95℃(可選,用于驗證擴(kuò)增特異性)。
結(jié)果判讀:
陽性:Ct值≤35且熔解曲線峰單一;
陰性:Ct值≥40或無擴(kuò)增曲線;
可疑:35<Ct值<40,建議復(fù)測或結(jié)合熔解曲線分析。
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注意事項:
所有耗材必須無核酸酶,吸頭一次性使用,禁止重復(fù)吸取;
陽性模板拷貝濃度高,開蓋操作輕柔,避免氣溶膠擴(kuò)散造成全域污染;
試劑融化后冰上放置不超過 2 h,用完立即放回 - 20℃;
廢棄 PCR 管、擴(kuò)增產(chǎn)物、實驗廢液統(tǒng)一 121℃高壓滅菌后丟棄;
試劑盒僅用于動植物、水產(chǎn)、微生物疫病科研檢測,禁止人體臨床檢測;
移液器、操作臺定期紫外消毒,長期污染需更換全新試劑盒全套試劑。
關(guān)鍵字: 反芻獸考德里氏體;PCR檢測試劑盒;
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