本試劑盒為水產(chǎn)專用試劑，靶向鮰愛(ài)德華氏菌特異性致病基因，可精準(zhǔn)檢測(cè)鮰魚(yú)等水產(chǎn)養(yǎng)殖樣本中的該致病菌核酸。試劑盒適配魚(yú)體病灶、肝胰腺、養(yǎng)殖水體樣本，檢測(cè)快速高效，適用于水產(chǎn)細(xì)菌性敗血癥的病原確診、養(yǎng)殖病害防控和水質(zhì)污染監(jiān)測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 鮰愛(ài)德華氏菌PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P014114 |
英文名稱 | Edwardsiella ictaluriPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
靶向鮰愛(ài)德華氏菌 tonB 毒力基因，水產(chǎn)魚(yú)肝腎組織細(xì)菌 DNA 特異性 PCR。
16S rRNA 熒光探針 qPCR，區(qū)分遲鈍愛(ài)德華菌與鮰愛(ài)德華氏菌。
病魚(yú)組織研磨裂解細(xì)菌，純化 DNA 后菌種特異性引物擴(kuò)增完成檢測(cè)。
?操作步驟?：
DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無(wú)抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（樣本制備區(qū)）
標(biāo)記6支離心管為7至2號(hào)，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照：
7號(hào)管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽(yáng)性對(duì)照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品；
依次稀釋至2號(hào)管，最終濃度跨5個(gè)數(shù)量級(jí)（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用，避免反復(fù)凍融。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL，含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測(cè)DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管，陰性對(duì)照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線分析（可選）。
?注意事項(xiàng)?：
試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，陽(yáng)性模板僅在生物安全柜開(kāi)蓋；
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實(shí)驗(yàn)后 121℃高壓滅菌再丟棄；
試劑避免反復(fù)凍融，單次融化冰上放置不超過(guò) 2 h，使用完畢立即放回 - 20℃；
移液器吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸取，防止交叉污染；
試劑盒僅用于科研檢測(cè)，嚴(yán)禁人臨床體外診斷；
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū)，防止氣溶膠大面積污染實(shí)驗(yàn)室；
若陰性對(duì)照持續(xù)出現(xiàn)雜帶，全部更換全新試劑盒，實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、移液器紫外過(guò)夜消毒。
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關(guān)鍵字： 鮰愛(ài)德華氏菌;PCR檢測(cè)試劑盒;
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