本試劑盒針對(duì)遲鈍愛(ài)德華菌保守致病基因設(shè)計(jì)特異性PCR擴(kuò)增體系，可專一性檢測(cè)水產(chǎn)樣本中的遲鈍愛(ài)德華菌核酸。產(chǎn)品精準(zhǔn)度高、抗雜質(zhì)干擾能力強(qiáng)，能夠快速確診水產(chǎn)遲鈍愛(ài)德華菌感染，為魚(yú)類細(xì)菌性疾病的對(duì)癥治療、養(yǎng)殖環(huán)境消殺提供檢測(cè)依據(jù)。
產(chǎn)品名稱 | 遲鈍愛(ài)德華菌PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P014116 |
英文名稱 | Edwardsiella tardaPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
靶向遲鈍愛(ài)德華氏菌特有 fim 菌毛基因，水產(chǎn)樣本 DNA 特異性 PCR 鑒定菌種。
Taqman 熒光探針靶向菌株 16S 變異區(qū)段，微量魚(yú)組織細(xì)菌即可檢出。
病魚(yú)脾臟裂解菌體提取核酸，菌種特異性引物擴(kuò)增條帶判定陽(yáng)性。
?操作步驟?：
1. DNA提取（樣本制備區(qū)）
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA，建議濃度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（獨(dú)立操作區(qū)）
標(biāo)記6管為梯度稀釋點(diǎn)（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽(yáng)性對(duì)照依次稀釋，混勻后作為標(biāo)準(zhǔn)品（避免污染）。
3. PCR反應(yīng)體系配制（試劑配制區(qū)）
按以下比例配制（示例）：
| 組分 | 體積（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機(jī)檢測(cè)
程序設(shè)置：預(yù)變性95℃ 3 min；40循環(huán)（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
?注意事項(xiàng)?：
1、實(shí)驗(yàn)分區(qū)管理?
實(shí)驗(yàn)全程需嚴(yán)格劃分三個(gè)獨(dú)立區(qū)域：?試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)?，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、移液器及耗材?嚴(yán)禁混用?，防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭，每步更換槍頭；
陽(yáng)性對(duì)照操作應(yīng)在專用生物安全柜中進(jìn)行，避免污染其他試劑；
加樣后立即蓋緊管蓋，避免氣溶膠擴(kuò)散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?，避免反復(fù)凍融，確保穩(wěn)定性；
使用前于冰上解凍并輕柔混勻，瞬時(shí)離心后使用。
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關(guān)鍵字： 遲鈍愛(ài)德華菌;PCR檢測(cè)試劑盒;
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