本試劑盒依托愛德華氏菌屬通用基因擴增技術(shù)，可廣譜檢測鮰愛德華氏菌、遲鈍愛德華菌等屬內(nèi)致病菌株核酸。試劑盒通用性強、特異性高，無交叉干擾，適配各類水產(chǎn)養(yǎng)殖樣本，適用于水產(chǎn)愛德華氏菌病的批量篩查、病原普查和養(yǎng)殖疫病管控。
產(chǎn)品名稱 | 愛德華氏菌通用PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014115 |
英文名稱 | Edwardsiella spp.PCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
愛德華氏菌屬共有 hsp60 保守基因，水產(chǎn)樣本細菌 DNA 廣譜篩查全部愛德華菌。
屬通用 SYBR Green qPCR 擴增核糖體間隔區(qū)，熔解曲線區(qū)分屬內(nèi)各菌種。
魚組織增菌液提取細菌 DNA，通用引物擴增保守基因，初篩愛德華菌污染。
?操作步驟?：
樣本制備：
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反應(yīng)體系配制（20 μL體系示例）：
預(yù)混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特異性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
補充無核酸酶水至終體積。
PCR擴增程序：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）；
熔解曲線分析：60~95℃（可選，用于驗證擴增特異性）。
結(jié)果判讀：
陽性：Ct值≤35且熔解曲線峰單一；
陰性：Ct值≥40或無擴增曲線；
可疑：35<Ct值<40，建議復(fù)測或結(jié)合熔解曲線分析。
?注意事項?：
所有耗材必須無核酸酶，吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸?。?/span>
陽性模板拷貝濃度高，開蓋操作輕柔，避免氣溶膠擴散造成全域污染；
試劑融化后冰上放置不超過 2 h，用完立即放回 - 20℃；
廢棄 PCR 管、擴增產(chǎn)物、實驗廢液統(tǒng)一 121℃高壓滅菌后丟棄；
試劑盒僅用于動植物、水產(chǎn)、微生物疫病科研檢測，禁止人體臨床檢測；
移液器、操作臺定期紫外消毒，長期污染需更換全新試劑盒全套試劑。
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關(guān)鍵字： 愛德華氏菌通用;PCR檢測試劑盒;
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