?產(chǎn)品名稱：馬動(dòng)脈炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱：Equine Arteritis Virus(EAV)RTPCR
貨號(hào)：YS-P014161
分類：PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格?：50T/盒
檢測(cè)原理：
采用實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR 技術(shù)，試劑盒內(nèi)置病毒特異性上下游引物與 TaqMan 熒光探針，提取樣本中馬動(dòng)脈炎病毒 RNA 后，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄生成 cDNA，擴(kuò)增過程探針結(jié)合靶基因序列，酶切后釋放熒光信號(hào)，依靠熒光增量定性判斷病毒存在。
普通一步法 RT-PCR 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，針對(duì)馬動(dòng)脈炎病毒保守基因設(shè)計(jì)特異性引物，樣本病毒 RNA 同步完成逆轉(zhuǎn)錄與 PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后觀察目標(biāo)條帶，有條帶即為陽(yáng)性樣本。
巢式 RT-PCR 檢測(cè)原理，設(shè)置內(nèi)外兩層特異性引物，第一輪擴(kuò)增病毒長(zhǎng)片段靶序列，第二輪???
實(shí)驗(yàn)流程：
1. DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA，建議濃度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（獨(dú)立操作區(qū)）
標(biāo)記6管為梯度稀釋點(diǎn)（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽(yáng)性對(duì)照依次稀釋，混勻后作為標(biāo)準(zhǔn)品（避免污染）。
3. PCR反應(yīng)體系配制（試劑配制區(qū)）
按以下比例配制（示例）：
| 組分 | 體積（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機(jī)檢測(cè)
程序設(shè)置：預(yù)變性95℃ 3 min；40循環(huán)（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
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注意事項(xiàng)：
1、實(shí)驗(yàn)分區(qū)管理?
實(shí)驗(yàn)全程需嚴(yán)格劃分三個(gè)獨(dú)立區(qū)域：?試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)?，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、移液器及耗材?嚴(yán)禁混用?，防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭，每步更換槍頭；
陽(yáng)性對(duì)照操作應(yīng)在專用生物安全柜中進(jìn)行，避免污染其他試劑；
加樣后立即蓋緊管蓋，避免氣溶膠擴(kuò)散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?，避免反復(fù)凍融，確保穩(wěn)定性；
使用前于冰上解凍并輕柔混勻，瞬時(shí)離心后使用。
關(guān)鍵字： 馬動(dòng)脈炎病毒;PCR檢測(cè)試劑盒;
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