基本信息?
產(chǎn)品名稱 | 2×SeamLess Mix 無縫重組酶 | 貨號 | P-PR1219 |
規(guī)格 | 20 次 | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：2×SeamLess Mix (Seamless Recombinase)
作用機制：利用同源重組原理，無需限制性內(nèi)切酶和連接酶，只需載體和插入片段兩端有較短的同源序列，即可在重組酶的作用下實現(xiàn)載體和插入片段的無縫連接，高效構(gòu)建重組質(zhì)粒。
適用樣本：適用于分子克隆實驗，可將目標(biāo)基因片段插入到各種載體中，樣本為PCR擴增得到的目標(biāo)基因片段和線性化的載體。
產(chǎn)品概述
2×SeamLess Mix無縫重組酶是一種用于分子克隆的新型酶制劑，基于同源重組原理實現(xiàn)DNA片段的無縫拼接。它包含多種重組酶組分，可識別DNA片段末端的同源序列（通常僅需15-25個堿基對），并高效催化同源序列之間的重組反應(yīng)，將目的DNA片段與載體無縫連接，無需限制性內(nèi)切酶切割與T4 DNA連接酶連接，大大簡化了克隆流程。該重組酶反應(yīng)條件溫和，通常在單一緩沖體系、37℃條件下短時間內(nèi)即可完成重組，且重組效率高，可用于單片段克隆、多片段拼接、載體構(gòu)建等多種克隆場景。其無縫連接特性避免了傳統(tǒng)克隆方法中殘留的酶切位點序列對目的基因表達或功能的影響，為基因克隆與載體構(gòu)建提供了高效、便捷的解決方案。
產(chǎn)品特點
無縫連接技術(shù)：無需限制性內(nèi)切酶與T4連接酶，通過同源重組直接連接DNA片段與載體，無冗余序列殘留。
高效重組效率：15-25bp同源序列即可實現(xiàn)高效重組，單片段克隆效率高達90%以上。
便捷操作流程：單一反應(yīng)體系，37℃孵育30分鐘即可完成重組，無需過夜連接。
多功能應(yīng)用：支持單片段克隆、多片段拼接、載體改造、定點突變等多種分子克隆操作。
核心PCR試劑及使用方法
1. Taq DNA聚合酶
作用：催化DNA鏈的延伸，是PCR反應(yīng)的核心酶
使用方法：
通常按0.5-2U/25μL體系添加，具體用量參照試劑說明書
酶對溫度敏感，需在冰上操作，避免反復(fù)凍融
最后加入酶液，防止提前激活導(dǎo)致非特異性擴增
2. dNTP混合液
作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）
使用方法：
終濃度一般為200μmol/L每種dNTP，總濃度800μmol/L
避免反復(fù)凍融，可分裝成小體積儲存
注意pH值，過酸或過堿會抑制聚合酶活性
3. PCR緩沖液
作用：提供酶促反應(yīng)的適宜環(huán)境（pH、離子濃度）
使用方法：
通常為10×濃度，使用時稀釋至1×終濃度
含Mg2+的緩沖液需注意Mg2+濃度，一般1.5-2.5mmol/L為最優(yōu)范圍
部分緩沖液含KCl、Tris-HCl等成分，無需額外添加
4. 引物（上游/下游）
作用：定位擴增區(qū)域，引導(dǎo)DNA合成起始
使用方法：
終濃度一般為0.1-1μmol/L，根據(jù)引物Tm值調(diào)整
引物需用TE緩沖液或無菌水溶解，濃度計算準(zhǔn)確
避免引物降解，-20℃分裝儲存，避免反復(fù)凍融
5. 模板DNA
作用：提供擴增的原始DNA模板
使用方法：
模板濃度一般為1ng-1μg/25μL體系，根據(jù)模板類型調(diào)整
基因組DNA需充分純化，避免蛋白、RNA等雜質(zhì)污染
質(zhì)粒DNA可適當(dāng)減少用量，一般10-100ng即可
公司正在出售的產(chǎn)品
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組織蛋白meiVELISA試劑盒 | ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白A4ELISA試劑盒 |
β1,4-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移mei2ELISA試劑盒 | CD134分子ELISA試劑盒 |
實驗流程
反應(yīng)體系配制：按1×工作濃度混合預(yù)混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及無核酸酶水。
PCR程序：
預(yù)變性：95℃ 30 sec
擴增循環(huán)（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（熒光采集）
熔解曲線分析：60-95℃梯度升溫。
注意事項
避免反復(fù)凍融，推薦分裝保存。
熔解曲線需呈現(xiàn)單一峰以確保擴增特異性。
若需絕對定量，建議配套標(biāo)準(zhǔn)品使用。
關(guān)鍵字： 2×SeamLess Mix 無縫重組;2×SeamLess Mix (Seam;
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