雙抗體夾心 ELISA 原理，酶標(biāo)板固定抗 JNK 捕獲抗體，樣本中絲裂原活化激酶 JNK 結(jié)合固相載體，酶標(biāo)檢測(cè)抗體形成夾心免疫復(fù)合物，洗滌顯色后依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量 JNK 蛋白含量。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E1015 |
英文名稱(chēng) | JNK ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢測(cè)限0.08ng/mL，精準(zhǔn)檢測(cè)大鼠JNK激酶微量表達(dá)變化
檢測(cè)范圍：0.15ng/mL - 90ng/mL，覆蓋大鼠氧化應(yīng)激、炎癥、凋亡模型樣本濃度
反應(yīng)時(shí)間：總反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)135分鐘，樣本孵育75分鐘，酶孵育30分鐘，顯色15分鐘，終止5分鐘
保存條件：核心試劑2 - 8℃避光冷藏，禁止凍存，微孔板條單獨(dú)密封防潮
有效期：原裝試劑盒有效期6個(gè)月，儲(chǔ)存條件合規(guī)可穩(wěn)定保質(zhì)
顯色系統(tǒng)：高靈敏TMB顯色體系，背景極低，顯色區(qū)分度優(yōu)異
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm檢測(cè)，570nm校正背景誤差
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制：7點(diǎn)梯度標(biāo)準(zhǔn)濃度，四參數(shù)邏輯擬合，R2≥0.996
特異性：特異性識(shí)別大鼠JNK激酶，無(wú)其他激酶、轉(zhuǎn)錄因子交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤5%，板間CV≤7%，重復(fù)性?xún)?yōu)異
注意事項(xiàng)：組織勻漿需低溫制備，防止激酶蛋白失活；孵育全程濕盒保濕，避免孔內(nèi)液體蒸發(fā)濃縮；嚴(yán)格控制顯色時(shí)間，避免過(guò)顯色或顯色不足
關(guān)鍵注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)前需仔細(xì)閱讀對(duì)應(yīng)試劑盒的說(shuō)明書(shū)，不同試劑盒的孵育時(shí)間、加樣量可能存在差異
所有試劑需按要求儲(chǔ)存，未用完的試劑需密封后放回規(guī)定溫度（通常2-8℃或-20℃）
避免試劑污染，不同組分的移液器槍頭需分開(kāi)使用
洗板時(shí)需確保每孔都被洗滌液覆蓋，防止出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果
顯色過(guò)程需避光，避免陽(yáng)光直射影響結(jié)果
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
試劑平衡：試劑盒室溫靜置 27min，濃縮洗滌液稀釋 20 倍，組織蛋白上清室溫平衡。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?zhuān)?/span>JNK 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋配制 6 梯度標(biāo)準(zhǔn)液，空白對(duì)照孔。
加樣孵育：各孔 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品、樣本，酶結(jié)合物 50μL，37℃避光孵育 62min。
洗板操作：洗滌液浸泡 33s，拍干殘液，洗板 5 次。
底物顯色：底物 A、B 各 50μL，避光孵育 16min。
終止讀數(shù)：終止液混勻，9min 內(nèi)讀取 450nm 吸光值。
數(shù)據(jù)計(jì)算：標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量 JNK 激酶蛋白，評(píng)價(jià) MAPK 應(yīng)激通路。
關(guān)鍵字： 大鼠c-Jun氨基末端激酶;JNK;ELISA試劑盒;
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