本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測原理，利用包被在酶標板上的大鼠GnRHR特異性單克隆抗體捕獲樣本中的GnRHR抗原，洗板去除未結合的非特異性物質后，加入對應的酶標記特異性檢測抗體，與捕獲的抗原形成穩(wěn)定的夾心免疫復合物，經(jīng)充分洗滌去除游離酶結合物后，加入顯色底物發(fā)生酶促顯色反應，顯色深淺與樣本中GnRHR含量呈正相關，終止反應后通過檢測吸光度值，對照標準曲線即可定量測定大鼠樣本中GnRHR的表達水平。
基本參數(shù)?：

產品名稱：大鼠促性腺激素釋放激素受體(GnRHR)ELISA試劑盒

英文名稱：GnRHR ELISA Kit
貨號：Y-E1056

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：最低檢測靈敏度≤0.5ng/mL

檢測范圍：1.0ng/mL - 40ng/mL

反應時間：總反應時長110分鐘（一抗溫育60分鐘、二抗溫育30分鐘、顯色20分鐘）

保存條件：試劑盒組分2-8℃保存，濃縮洗滌液室溫避光保存

有效期：原裝未開封有效期12個月，開封后試劑1個月內用完

顯色系統(tǒng)：TMB單一穩(wěn)定顯色體系，酸性終止液終止反應

檢測波長：450nm單波長檢測

標準曲線繪制：梯度標準品濃度對應OD值，四參數(shù)擬合生成標準曲線，R2≥0.990

特異性：僅特異性結合大鼠GnRHR，與其他激素受體無交叉識別，特異性＞95%

重復性：板內CV≤7%，板間CV≤9%

注意事項：受體蛋白穩(wěn)定性較差，樣本采集后需低溫離心分裝、-80℃保存，避免反復凍融；溫育溫度嚴格控制在37℃，溫度偏差會影響結合效率。
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。
實驗步驟如下：

試劑盒洗滌濃縮液、顯色液、標準品 4℃避光靜置解凍，大鼠組織勻漿樣本冰上融化，避免受體蛋白降解。

酶標板標記孔位，標準品孔添加梯度 GnRHR 重組蛋白 100μL，樣本孔加 100μL 大鼠組織上清，空白孔僅加緩沖液 100μL。

一步法混合液（酶標二抗 + GnRHR 捕獲抗體）每孔添加 200μL，覆膜封閉，37℃水浴避光孵育 75min。

棄去孔中反應液，洗滌液注滿微孔浸泡 45s，反復洗滌 5 次，吸水紙垂直拍干微孔殘留洗液。

避光添加單一 TMB 顯色液 100μL，37℃避光孵育 20min，控制顯色深淺避免過飽和。

加入硫酸終止液 50μL，橫向輕搖酶標板 30s 充分中和顯色體系。

即刻上機檢測 OD450 數(shù)值，依據(jù)標準曲線換算大鼠樣本 GnRHR 蛋白表達量。
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