本試劑盒采用間接ELISA檢測原理，將純化的大鼠GNRHR抗原包被于酶標(biāo)板微孔，封閉非特異性結(jié)合位點后，加入待測大鼠樣本及標(biāo)準(zhǔn)品，樣本中的GNRHR-Ab會與固相抗原特異性結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合成分，再加入酶標(biāo)記的二抗與結(jié)合的抗體特異性結(jié)合，經(jīng)洗滌后加入底物顯色液進行顯色，終止反應(yīng)后測定吸光度，顯色強度與樣本中GNRHR-Ab含量成正比，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計算出樣本中抗體的濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠促性腺激素釋放激素受體抗體(GNRHR-Ab)ELISA試劑盒
英文名稱：GNRHR-Ab ELISA Kit
貨號：Y-E1072
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測滴度1:20，最低定量濃度≤0.2μg/mL
檢測范圍：0.5μg/mL - 20μg/mL
反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長120分鐘（包被結(jié)合60分鐘、抗體孵育40分鐘、顯色20分鐘）
保存條件：2-8℃避光保存，抗體組分嚴(yán)禁冷凍、高溫環(huán)境放置
有效期：未開封12個月，開封后密封保存，2周內(nèi)使用完畢
顯色系統(tǒng)：高靈敏度TMB顯色體系，快速顯色、背景值低
檢測波長
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋，測定OD值后采用四參數(shù)Logistic回歸擬合曲線
特異性：特異性結(jié)合大鼠GNRHR抗體，與其他激素抗體無交叉反應(yīng)，特異性極強
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤8%，板間CV≤11%
注意事項：避免樣本中存在異嗜性抗體干擾；顯色時間需嚴(yán)格統(tǒng)一，超時會導(dǎo)致背景升高；終止液具有腐蝕性，操作需佩戴防護手套。
關(guān)鍵注意事項：
本試劑盒僅科研體外檢測，嚴(yán)禁臨床診斷使用。
全程避免試劑、板條強光直射，TMB 見光易失效。
移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無酶、無熱源。
孵育溫度嚴(yán)格控制 37℃，溫度偏低會降低 OD 值、靈敏度下降。
洗板必須充分，殘液會造成非特異性結(jié)合，背景偏高。
終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會漂移，結(jié)果失真。
終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。
實驗廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。
不同批次試劑盒組分不可混用。
試劑盒運輸全程 2～8℃冷鏈，嚴(yán)禁高溫暴曬。
實驗步驟如下：
試劑盒全部組分室溫復(fù)溫 25min，配制 1:25 稀釋洗滌緩沖液，大鼠血漿樣本低速離心去除雜質(zhì)沉淀。
酶標(biāo)微孔板區(qū)分陰性對照孔、標(biāo)準(zhǔn)抗體孔、待測大鼠樣本孔，各孔分別加入 100μL 對應(yīng)液體。
直接加入酶偶聯(lián)抗原工作液 100μL，封板，37℃恒溫孵育 50min，全程避光操作。
洗滌操作：每孔加滿洗滌液浸泡 20s，棄液重復(fù)洗滌 3 次，倒置板條吸干水分。
避光加入顯色混合液 100μL，室溫避光顯色 12min，不可延長孵育時間。
加終止液 50μL 終止免疫顯色反應(yīng)，震蕩混勻微孔內(nèi)液體。
酶標(biāo)儀 450nm 測吸光度，比對標(biāo)準(zhǔn)曲線判定大鼠體內(nèi) GNRHR-Ab 抗體含量。
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關(guān)鍵字： 大鼠促性腺激素釋放激素受體抗體;GNRHR-Ab;ELISA試劑盒;
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