雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗，固相微孔板預包被抗大鼠 IL-13 捕獲抗體，樣本 IL-13 蛋白結合固定抗體，洗滌去除未結合組分后加入酶標記抗 IL-13 檢測抗體構建夾心免疫復合物，顯色測吸光度，標準曲線定量 IL-13 濃度。
產品參數：

?靈敏度：最低檢測靈敏度≤1pg/mL

檢測范圍：2pg/mL - 220pg/mL

反應時間：孵育120分鐘，二抗反應60分鐘，避光顯色15分鐘

保存條件：2-8℃冷藏避光，所有組分禁止冷凍、高溫放置

有效期：未開封有效期6個月

顯色系統：優(yōu)化型TMB顯色系統，背景低、靈敏度高

檢測波長：450nm檢測吸光度

標準曲線繪制：標準品梯度稀釋，測定OD值，四參數擬合繪制標準曲線，換算樣本IL-13含量

特異性：專一識別大鼠IL-13，與IL-4、IL-5等Th2型細胞因子無交叉反應

重復性：板內CV≤7%，板間CV≤9%

注意事項：1. 渾濁、溶血樣本需預處理或棄用；2. 加樣精準，孔間誤差最小化；3. 洗板規(guī)范，無殘留洗液；4. 試劑恢復室溫后再實驗。
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結合物、神經遞質 / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結果乘以稀釋倍數；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

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實驗操作流程：

試劑平衡：試劑盒室溫復溫 25min，20× 洗滌液蒸餾水稀釋，酶結合物混勻。

標準品稀釋：IL-13 凍干標準品溶解配置 6 個梯度，現配現用。

樣本上樣：標準孔 50μL 梯度標準液，氣道免疫細胞上清 50μL 上樣。

酶結合物孵育：每孔 50μL HRP 標記 IL-13 抗體，封膜 37℃避光孵育 60min。

洗板：洗滌液浸泡 31s，拍干，循環(huán)洗板 5 次。

顯色：TMB 底物各 50μL，避光 37℃孵育 15min。

終止檢測：終止液混勻，8min 內 450nm 讀數，換算 IL-13 濃度。