本試劑盒以雙抗體夾心ELISA法為核心檢測(cè)原理,酶標(biāo)板微孔預(yù)先包被抗大鼠IL-27特異性捕獲抗體,加入待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品后,樣本內(nèi)的IL-27抗原被固相抗體特異性捕獲,洗板去除非特異性結(jié)合物質(zhì),再加入HRP標(biāo)記的抗大鼠IL-27檢測(cè)抗體,形成固相抗體-IL-27抗原-酶標(biāo)抗體的三元復(fù)合物,經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后,利用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度-吸光度對(duì)應(yīng)關(guān)系,精準(zhǔn)定量大鼠樣本中IL-27的表達(dá)含量。
基本參數(shù)?:

產(chǎn)品名稱:大鼠白介素27(IL-27)ELISA試劑盒
英文名稱:IL-27 ELISA Kit
貨號(hào):Y-E1300
規(guī)格:48T/96T
靈敏度:最低檢測(cè)濃度≤0.9pg/mL
檢測(cè)范圍:2pg/mL - 700pg/mL
反應(yīng)時(shí)間:全程3.8小時(shí),包含洗板、孵育、顯色完整流程
保存條件:所有試劑2-8℃保存,禁止冷凍,避免陽(yáng)光直射
有效期:原裝試劑盒6個(gè)月,開(kāi)封后密封保存可使用30天
顯色系統(tǒng):高靈敏度TMB顯色體系,顯色均勻穩(wěn)定
檢測(cè)波長(zhǎng):450nm主波長(zhǎng)檢測(cè)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋,以濃度-OD值擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線,相關(guān)系數(shù)R2>0.99
特異性:特異性識(shí)別大鼠IL-27分子,交叉反應(yīng)率極低,不識(shí)別其他物種同源蛋白
重復(fù)性:板內(nèi)CV≤7.5%,板間CV≤9.5%
注意事項(xiàng):洗板需充分,避免殘留洗液影響顯色;試劑使用前需平衡至室溫;廢棄試劑按生物廢液規(guī)范處理
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作:

1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分(酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液)從 2~8℃取出,室溫(20~25℃)放置平衡 30min,嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制:按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋(常見(jiàn) 20× 濃縮液:1 份濃縮液 + 19 份純水),混勻備用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋:
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解,室溫靜置 10min,輕柔吹打混勻;
按說(shuō)明書(shū)梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品,單獨(dú)標(biāo)記,剩余原液分裝 - 20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理:血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋,渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清;溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備:恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀(450nm 主波長(zhǎng),630nm 參比)、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)(或手動(dòng)洗板槽)、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染,移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條,剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋,加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記:空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔(所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差)。
實(shí)驗(yàn)步驟如下:

試劑室溫平衡 28min,溶解 IL-27 標(biāo)準(zhǔn)品并做倍比稀釋,標(biāo)記酶標(biāo)板所有微孔組別;
標(biāo)準(zhǔn)孔、樣本孔分別加入 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品、大鼠血漿樣本,空白孔加入純樣本稀釋液;
即刻向全部微孔加入 100μL 酶標(biāo)記 IL-27 檢測(cè)抗體,覆膜密封酶標(biāo)板;
37℃孵育 65min,一步完成抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物結(jié)合反應(yīng);
洗板液加滿微孔浸泡 30s,徹底拍干,循環(huán)洗滌 6 次去除未結(jié)合雜質(zhì);
避光添加顯色底物混合液 100μL,37℃避光顯色 16min;
加入終止液 50μL,充分混勻,酶標(biāo)儀 450nm 讀數(shù),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算 IL-27 表達(dá)量。
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關(guān)鍵字: 大鼠白介素27;IL-27;ELISA試劑盒;
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