本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，預(yù)先將純化的大鼠GHRP-Ghrelin特異性抗體包被于酶標(biāo)板微孔。加入待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品后，目標(biāo)抗原與固相抗體特異性免疫結(jié)合，洗孔清除游離物質(zhì)，再加入酶標(biāo)記檢測(cè)抗體形成穩(wěn)定復(fù)合物。經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后檢測(cè)吸光度，數(shù)值隨樣本Ghrelin含量升高而增大，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)定量大鼠生長(zhǎng)激素釋放肽的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測(cè)下限0.18pg/mL，可精準(zhǔn)檢出低濃度Ghrelin多肽。

檢測(cè)范圍：0.4pg/mL - 110pg/mL，適配大鼠血清、胃組織、腸道組織樣本。

反應(yīng)時(shí)間：全程100分鐘，抗原溫育40分鐘、酶標(biāo)抗體溫育35分鐘、顯色25分鐘。

保存條件：2-8℃避光保存，濃縮試劑嚴(yán)禁冷凍，開蓋后及時(shí)密封。

有效期：原裝有效期12個(gè)月，開封后1個(gè)月內(nèi)使用完畢。

特異性：專一識(shí)別大鼠Ghrelin，與GHRP同源多肽無交叉免疫反應(yīng)。

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤7.2%，板間CV≤9.2%，胃腸調(diào)節(jié)因子檢測(cè)穩(wěn)定。

注意事項(xiàng)：胃腸組織樣本需去除內(nèi)容物，充分清洗后研磨，避免雜質(zhì)干擾結(jié)果。
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

試劑盒室溫平衡 35min，稀釋濃縮洗滌液，逐級(jí)配制 Ghrelin 標(biāo)準(zhǔn)品梯度液，酶標(biāo)板標(biāo)記空白、標(biāo)準(zhǔn)、樣本孔，大鼠胃組織勻漿離心制備待測(cè)上清。

標(biāo)準(zhǔn)品孔加入 Ghrelin 梯度標(biāo)準(zhǔn)液 50μL，樣本孔加入待測(cè)上清 50μL，空白孔加樣本稀釋液 50μL，每孔加入酶結(jié)合物工作液 100μL，封膜封閉。

37℃避光孵育 70min，夾心免疫反應(yīng)充分進(jìn)行。

掀開封板傾倒廢液，洗滌液注滿每孔浸泡 33s，重復(fù)洗板 5 次，吸水紙拍干板條殘留液體。

每孔依次滴加顯色 A 液、B 液各 50μL，混勻后 37℃避光顯色 20min。

逐孔添加終止液 50μL 終止顯色，輕微振蕩酶標(biāo)板混勻體系。

10min 內(nèi) 450nm 測(cè)定 OD 值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算 Ghrelin 含量。