本試劑盒運用雙抗體夾心ELISA技術原理,將大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)特異性抗體固定于酶標板孔內(nèi),加入待測大鼠樣本后,樣本中的TM抗原與包被抗體特異性結合,再加入酶標記特異性抗體形成夾心免疫復合物,充分反應后洗滌洗凈未結合物質(zhì),經(jīng)底物顯色、終止反應后,酶標儀檢測吸光度,顯色強度與樣本中TM含量正相關,結合標準曲線實現(xiàn)TM的定量檢測。
基本參數(shù)?:

產(chǎn)品名稱:大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒
英文名稱:TM ELISA Kit
貨號:Y-E1457
規(guī)格:48T/96T
靈敏度:最低檢測濃度0.08ng/mL
檢測范圍:0.2ng/mL - 40ng/mL
反應時間:總反應時長90分鐘
保存條件:所有組件2-8℃冷藏保存,嚴禁冷凍結冰
有效期:未開封完好保存6個月
特異性:特異性結合大鼠TM蛋白,與內(nèi)皮細胞同源蛋白無交叉反應
重復性:板內(nèi)變異系數(shù)≤5.5%,板間變異系數(shù)≤7.5%
注意事項:避免樣本溶血,溶血樣本會干擾顯色結果,試劑混勻禁止劇烈震蕩
實驗前準備工作:

1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分(酶標板、標準品、酶結合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液)從 2~8℃取出,室溫(20~25℃)放置平衡 30min,嚴禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制:按標簽標注比例用去離子純水稀釋(常見 20× 濃縮液:1 份濃縮液 + 19 份純水),混勻備用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
標準品復溶 / 梯度稀釋:
凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解,室溫靜置 10min,輕柔吹打混勻;
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品,單獨標記,剩余原液分裝 - 20℃避光保存,避免反復凍融。
待測樣本預處理:血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋,渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清;溶血、脂血嚴重樣本棄用。
2. 耗材與設備準備
設備:恒溫 37℃孵育箱、酶標儀(450nm 主波長,630nm 參比)、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(或手動洗板槽)、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染,移液槍提前校準。
取出本次實驗所需酶標板條,剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋,加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標記
酶標板做好分區(qū)標記:空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔(所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差)。
實驗步驟如下:

試劑盒室溫平衡 28min,稀釋洗滌液,梯度配制 TM 標準品溶液,分離制備大鼠待測血清樣本。
劃分酶標板孔位,標準孔加梯度 TM 標準液,樣本孔加稀釋后血清,空白孔加基礎稀釋液,每孔加入酶偶聯(lián)試劑,覆膜封口。
37℃恒溫避光孵育 60min,防止板條移位造成孔間交叉污染。
撕掉封板膜,倒凈廢液,洗滌液浸泡每孔 30s,甩干,循環(huán)洗板 5 次,吸水紙拍干微孔。
依次添加顯色 A、B 底物液,震蕩混勻,37℃避光顯色 16min。
加入終止液終止顯色,搖勻酶標板。
450nm 波長檢測 OD 值,根據(jù)標準曲線定量樣本 TM 濃度。
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關鍵字: 大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白;TM;ELISA試劑盒;
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