本試劑盒基于雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測原理，酶標板預包被純化的大鼠瘦素LEP特異性抗體。檢測體系中，樣本、標準品中的LEP抗原與固相抗體特異性結合，洗滌去除游離雜質后，加入酶標記的LEP檢測抗體，構建完整的免疫夾心復合物。經(jīng)顯色、終止、吸光度檢測步驟，結合標準曲線可精準測算大鼠樣本中瘦素的表達濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測濃度0.15ng/mL，精準檢測脂肪代謝微量瘦素。

檢測范圍：0.4ng/mL - 80ng/mL，適配大鼠血清、脂肪組織、腦脊液樣本。

反應時間：全程85分鐘，樣本溫育30分鐘、二抗溫育30分鐘、顯色25分鐘。

保存條件：2-8℃冷藏避光，試劑密封保存，防止蛋白失活。

有效期：未開封有效期12個月，開封后4周內(nèi)用完。

特異性：特異性識別大鼠瘦素，與脂聯(lián)素、抵抗素無交叉反應。

重復性：板內(nèi)CV≤6.2%，板間CV≤8.2%，代謝激素檢測精度高。

注意事項：高脂血清樣本需靜置澄清后檢測，避免脂類物質干擾實驗結果。
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑盒常溫放置 25min，稀釋洗滌液，梯度稀釋瘦素 LEP 標準品，拆分酶標板條并標記，大鼠脂肪組織勻漿上清作為待測樣本。

標準孔加入 LEP 標準稀釋液 50μL，樣本孔加入勻漿上清 50μL，空白孔補稀釋緩沖液 50μL，全孔加入酶標記二抗工作液 100μL，密封封板。

37℃避光孵育 55min，固相載體捕獲瘦素抗原。

去除封板棄液，洗滌液浸泡每孔 36s，甩干洗板 5 次，去除非特異性吸附組分。

每孔加注顯色 A、B 液各 50μL，混勻后 37℃避光顯色 14min。

加入終止液 50μL 終止顯色反應，輕晃酶標板混勻。

450nm 波長讀取 OD 值，計算樣本瘦素 LEP 含量。