本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，96孔微孔板固定人瘦素受體(LEPR)特異性抗體，樣本與標(biāo)準(zhǔn)品中的LEPR抗原與固相抗體特異性免疫結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后加入酶標(biāo)記檢測(cè)抗體，形成穩(wěn)定夾心復(fù)合物，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后檢測(cè)吸光度，數(shù)值高低對(duì)應(yīng)樣本中LEPR的濃度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可準(zhǔn)確計(jì)算靶標(biāo)含量。
基本參數(shù)?：

產(chǎn)品名稱：人瘦素受體(LEPR)ELISA試劑盒

英文名稱：LEPR ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E2525

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：檢出限 0.09ng/mL

檢測(cè)范圍：0.6ng/mL ~ 140ng/mL

反應(yīng)時(shí)間：37℃孵育 71min，二抗溫育 51min，底物顯色 18min，總用時(shí) 2h20min

保存條件：未拆封 2~8℃，分裝濃縮試劑可 - 20℃凍存 6 個(gè)月，開封板條密封防潮

顯色系統(tǒng)：A、B 顯色液分開添加混勻終止

檢測(cè)波長(zhǎng)：僅 450nm 波長(zhǎng)檢測(cè)

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：五參數(shù)非線性擬合，8 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品梯度點(diǎn)

注意事項(xiàng)：肥胖與消瘦個(gè)體基線差異大，需設(shè)置同批次對(duì)照樣本；樣本不可溶血
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：

試劑盒室溫回溫 31min，稀釋濃縮洗滌液，梯度稀釋 LEPR 標(biāo)準(zhǔn)品，拆分實(shí)驗(yàn)用板條。

標(biāo)準(zhǔn)品孔加入 50μL 梯度 LEPR 標(biāo)準(zhǔn)液；樣本孔加 43μL 稀釋液 + 7μL 樣本；空白孔無加樣。

檢測(cè)孔加入酶標(biāo)記抗 LEPR 抗體 100μL，封板 37℃孵育 68min。

倒掉孔內(nèi)廢液，洗滌液浸泡每孔 35s 甩干，洗板 6 次，充分拍干板條。

每孔加入顯色雙液各 50μL，混勻后 37℃避光顯色 17min。

加入終止液 50μL 混勻終止酶促反應(yīng)。

酶標(biāo)儀 450nm 測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 LEPR 濃度。
公司正在出售的產(chǎn)品：