本試劑盒依托雙抗體夾心ELISA技術(shù)原理，微孔板固定有抗人胰抑制素特異性抗體，作為固相捕獲載體，加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本，樣本中的胰抑制素抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除非特異性雜質(zhì)，加入酶標(biāo)記檢測(cè)抗體形成免疫復(fù)合物，洗滌游離酶標(biāo)抗體后進(jìn)行底物顯色，終止反應(yīng)后檢測(cè)吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線精準(zhǔn)定量樣本中胰抑制素的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最小檢出 9pg/mL

檢測(cè)范圍：35~2240pg/mL

反應(yīng)時(shí)間：樣本孵育 70min，二抗 40min，顯色 15min，合計(jì) 125min

保存條件：2~8℃儲(chǔ)存，濃縮洗滌液稀釋比例嚴(yán)格按照說明書配比

顯色系統(tǒng)：OPD 顯色底物系統(tǒng)

檢測(cè)波長(zhǎng)：492nm 讀數(shù)，600nm 扣除背景

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：六點(diǎn)位標(biāo)準(zhǔn)品，直線回歸構(gòu)建校準(zhǔn)曲線

注意事項(xiàng)：胃腸道消化液極易降解該多肽，樣本采集后快速處理
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

血漿樣本稀釋：空腹血漿稀釋配比混勻，室溫靜置 10min；試劑室溫平衡 29min。

加樣封板孵育：微孔加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)血漿與酶標(biāo)記液，密封酶標(biāo)板 37℃孵育 64min。

洗板流程：洗滌液浸泡微孔 30s，洗板 5 次，拍干微孔內(nèi)廢液。

底物顯色：加入顯色 A、B 液避光混勻，37℃顯色 15min。

終止反應(yīng)：滴加終止液輕搖酶標(biāo)板混勻。

酶標(biāo)儀檢測(cè)：450nm 讀取各孔 OD 吸光度數(shù)據(jù)。

定量計(jì)算：標(biāo)準(zhǔn)曲線換算稀釋倍數(shù)獲得胰抑制素濃度。