本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA原理制備，酶標(biāo)板微孔包被有小鼠可溶性CD30（sCD30）特異性捕獲抗體。檢測過程中，樣本、標(biāo)準(zhǔn)品中的sCD30抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗去游離雜質(zhì)后，加入HRP標(biāo)記的sCD30檢測抗體，形成穩(wěn)定的免疫夾心復(fù)合物。充分洗滌后加入TMB底物顯色，酶促反應(yīng)的顯色深淺與樣本中sCD30含量成正比，終止反應(yīng)后通過酶標(biāo)儀檢測吸光度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可精準(zhǔn)計(jì)算樣本中目標(biāo)蛋白的濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：小鼠可溶性CD30(sCD30)ELISA試劑盒
英文名稱：sCD30 ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E2076
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：檢出下限 0.06ng/mL
檢測范圍：0.13ng/mL～32ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：37℃孵育樣本 82min，酶標(biāo)二抗 49min，底物顯色 18min，終止檢測，合計(jì) 149min
保存條件：試劑盒 2～8℃冷藏；拆封板條放入自封袋加干燥劑密封
顯色系統(tǒng)：單組份穩(wěn)定 TMB 顯色液
檢測波長：450nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)置雙復(fù)孔取平均值
注意事項(xiàng)：細(xì)胞培養(yǎng)上清過濾后再檢測；避免強(qiáng)光直射微孔板影響顯色。
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對(duì)照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒室溫平衡 36min，稀釋濃縮洗滌液，梯度稀釋 sCD30 標(biāo)準(zhǔn)品。
酶標(biāo)板分孔加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測體液樣本、空白稀釋液。
一步加入酶偶聯(lián)檢測液，封板 37℃避光孵育 66min。
洗板 5 次，每次浸泡 28s，倒扣拍干微孔。
遮光條件下顯色 17min。
加入終止液終止反應(yīng)，混勻板面液體。
酶標(biāo)儀測 OD 值，換算 sCD30 濃度。
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關(guān)鍵字： 小鼠可溶性CD30;sCD30;ELISA試劑盒;
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