本試劑盒基于雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，酶標板微孔包被有小鼠主要組織相容性復合體Ⅰ類（MHCⅠ/H-2Ⅰ）特異性捕獲抗體。檢測過程中，樣本與標準品中的MHCⅠ抗原與固相抗體特異性結合，洗滌去除游離雜質成分后，加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體，形成穩(wěn)定的免疫夾心結構。充分洗滌后加入TMB底物顯色，酶促反應顯色深淺與樣本中MHCⅠ含量正相關，終止反應后檢測吸光度，依據(jù)標準曲線可精準測定樣本中目標抗原的含量。
基本參數(shù)?：

產(chǎn)品名稱：小鼠主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/H-2Ⅰ)ELISA試劑盒

英文名稱：MHCⅠ/H-2Ⅰ ELISA Kit
貨號：Y-E2474

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：檢出限 0.14ng/mL

檢測范圍：0.28ng/mL～27ng/mL

反應時間：室溫孵育 84min，二抗 47min，底物顯色 16min，終止檢測，合計 147min

保存條件：試劑盒 2～8℃；微孔板開封后密封加干燥劑，防止包被位點失活

顯色系統(tǒng)：單組份穩(wěn)定 TMB 顯色液

檢測波長：450nm

標準曲線繪制：倍比稀釋標準品，非線性回歸擬合標準曲線

注意事項：淋巴細胞樣本新鮮制備；操作環(huán)境避免灰塵落入微孔孔內(nèi)。
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。
實驗步驟如下：

試劑盒室溫回溫 24min，稀釋洗滌液，倍比稀釋 H-2Ⅰ 標準蛋白品。

酶標板加入標準品、小鼠細胞懸液上清樣本、空白稀釋液。

一步添加酶偶聯(lián)檢測抗體，封板避光 37℃孵育 69min。

洗板 6 次，每次浸泡 34s，徹底拍干微孔內(nèi)液體。

顯色混合液遮光顯色 18min。

終止液終止顯色反應，混勻反應體系。

酶標儀讀板，計算 MHCⅠ 分子表達水平。
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