該試劑盒依托PCR分子擴(kuò)增技術(shù)，特異性靶向溶血性曼氏桿菌核心基因序列，可快速檢測(cè)畜禽樣本中的溶血性曼氏桿菌核酸。該菌是畜禽呼吸道疾病主要致病菌之一，本試劑盒靈敏度高、抗樣本雜質(zhì)干擾能力強(qiáng)，可適配肺組織、鼻腔分泌物等多種樣本，檢測(cè)結(jié)果精準(zhǔn)可靠，適用于牛羊、家禽溶血性曼氏桿菌感染的快速診斷、耐藥性輔助檢測(cè)及疫病防控監(jiān)測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 溶血性曼氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P014400 |
英文名稱(chēng) | Mannheimia haemolyticaPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
鼻拭子樣本經(jīng)核酸純化柱富集溶血性曼氏桿菌 DNA，針對(duì)溶血素基因進(jìn)行特異性擴(kuò)增。
SYBR Green 熒光染料結(jié)合擴(kuò)增雙鏈 DNA，通過(guò)熔解溫度峰值區(qū)分溶血性菌株擴(kuò)增產(chǎn)物。
陽(yáng)性對(duì)照使用滅活溶血性曼氏桿菌基因組 DNA，驗(yàn)證整套擴(kuò)增體系酶活性正常。
?操作步驟?：
樣本制備：
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反應(yīng)體系配制（20 μL體系示例）：
預(yù)混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特異性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
補(bǔ)充無(wú)核酸酶水至終體積。
PCR擴(kuò)增程序：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線(xiàn)分析：60~95℃（可選，用于驗(yàn)證擴(kuò)增特異性）。
結(jié)果判讀：
陽(yáng)性：Ct值≤35且熔解曲線(xiàn)峰單一；
陰性：Ct值≥40或無(wú)擴(kuò)增曲線(xiàn)；
可疑：35<Ct值<40，建議復(fù)測(cè)或結(jié)合熔解曲線(xiàn)分析。
?注意事項(xiàng)?：
所有耗材必須無(wú)核酸酶，吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸??；
陽(yáng)性模板拷貝濃度高，開(kāi)蓋操作輕柔，避免氣溶膠擴(kuò)散造成全域污染；
試劑融化后冰上放置不超過(guò) 2 h，用完立即放回 - 20℃；
廢棄 PCR 管、擴(kuò)增產(chǎn)物、實(shí)驗(yàn)廢液統(tǒng)一 121℃高壓滅菌后丟棄；
試劑盒僅用于動(dòng)植物、水產(chǎn)、微生物疫病科研檢測(cè)，禁止人體臨床檢測(cè)；
移液器、操作臺(tái)定期紫外消毒，長(zhǎng)期污染需更換全新試劑盒全套試劑。
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