該試劑盒聚焦異源曼氏桿菌的分子檢測,基于該菌株獨(dú)特的基因序列構(gòu)建專屬PCR擴(kuò)增體系,可精準(zhǔn)區(qū)分異源曼氏桿菌與其他常見曼氏桿菌及致病菌。試劑盒特異性強(qiáng)、無交叉反應(yīng),靈敏度可達(dá)微量核酸檢出水平,能夠有效檢出低載量感染樣本,適用于畜禽疑難感染病例病原鑒定、養(yǎng)殖環(huán)境病原溯源及菌種分型檢測。
產(chǎn)品名稱 | 異源曼氏桿菌PCR檢測試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P014403 |
英文名稱 | Mannheimia varigenaPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理:

組織樣本去除宿主蛋白雜質(zhì)后提取細(xì)菌 DNA,引物靶向異源曼氏桿菌獨(dú)有間隔基因擴(kuò)增。
探針熒光定量體系,探針僅與異源曼氏桿菌擴(kuò)增序列互補(bǔ)結(jié)合,無靶標(biāo)則無熒光釋放。
梯度退火溫度優(yōu)化引物結(jié)合特異性,避免與同屬曼氏桿菌發(fā)生非特異性結(jié)合。
?操作步驟?:

1. 樣本處理
提取待測樣本RNA,建議使用商品化RNA提取試劑盒。
2. 陽性對照稀釋(示例:6個(gè)梯度)
標(biāo)記離心管(7至2號(hào)),每管加入45μL模板稀釋液。
按10倍梯度稀釋陽性對照,避免交叉污染。
3. PCR反應(yīng)體系配制(20μL/反應(yīng))
| 組分 | 體積(μL) |
| RT-PCR反應(yīng)液 | 10 |
| 熒光染料 | 0.5 |
| 引物混合液 | 2 |
| RNA模板 | 2 |
| RNase-free水 | 補(bǔ)至20 |
4. 上機(jī)程序
逆轉(zhuǎn)錄:50℃ 15分鐘(可選,根據(jù)病毒RNA特性調(diào)整)。
預(yù)變性:95℃ 2分鐘。
循環(huán):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號(hào)),共40循環(huán)。
?注意事項(xiàng)?:

避免反復(fù)凍融試劑,解凍后需充分混勻。
實(shí)驗(yàn)環(huán)境需嚴(yán)格分區(qū)(試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)),防止污染。
陽性對照需與樣本分裝操作。
本產(chǎn)品僅限科研用途,不可用于臨床診斷。
操作時(shí)需穿戴防護(hù)裝備,避免試劑接觸皮膚或眼睛。
樣本采集需遵循無菌原則,運(yùn)輸時(shí)使用干冰或冰袋保存。
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