本試劑盒專為牛眼莫拉氏菌核酸檢測研發(fā)，靶向該菌株特有基因片段進行PCR擴增，可精準檢測牛眼部分泌物、眼組織樣本中的致病菌核酸。該菌是牛結(jié)膜炎主要致病菌，本試劑盒檢測快速、準確率高，可早期確診牛眼部感染病因，適用于規(guī)模化牛場眼部疫病篩查、臨床病例診斷、養(yǎng)殖疫病防控。
產(chǎn)品名稱 | 牛眼莫拉氏菌PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014431 |
英文名稱 | Moraxella bovoculiPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
牛眼結(jié)膜拭子提取細菌 DNA，靶向牛眼莫拉氏菌毒力黏附基因特異性擴增。
凝膠電泳觀察目標擴增條帶，快速判定眼部莫拉氏菌感染。
結(jié)膜無菌緩沖液空白對照，排除環(huán)境雜菌污染假陽性。
?操作步驟?：
DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無抑制劑殘留。
標準曲線制備（樣本制備區(qū)）
標記6支離心管為7至2號，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽性對照：
7號管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標準品；
依次稀釋至2號管，最終濃度跨5個數(shù)量級（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標準品置于冰上備用，避免反復凍融。
試劑配制（試劑準備區(qū)）
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL，含預混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測DNA或標準品至反應(yīng)管，陰性對照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴增（核酸擴增區(qū)）
按以下程序運行定量PCR儀：
預變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）；
熔解曲線分析（可選）。
?注意事項?：
試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，陽性模板僅在生物安全柜開蓋；
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實驗后 121℃高壓滅菌再丟棄；
試劑避免反復凍融，單次融化冰上放置不超過 2 h，使用完畢立即放回 - 20℃；
移液器吸頭一次性使用，禁止重復吸取，防止交叉污染；
試劑盒僅用于科研檢測，嚴禁人臨床體外診斷；
擴增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū)，防止氣溶膠大面積污染實驗室；
若陰性對照持續(xù)出現(xiàn)雜帶，全部更換全新試劑盒，實驗室臺面、移液器紫外過夜消毒。
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關(guān)鍵字： 牛眼莫拉氏菌;PCR檢測試劑盒;
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