本試劑盒針對卟啉單胞菌屬通用保守基因設(shè)計廣譜引物，可一次性快速篩查各類卟啉單胞菌致病菌，無需單獨分型，適配批量樣本初篩檢測。試劑盒擴增體系穩(wěn)定，特異性無交叉反應(yīng)，可規(guī)避口腔、組織中其他雜菌干擾，樣本適配性廣。適用于動物源性卟啉單胞菌群體性感染篩查、微生物菌群檢測、感染性疫病初診及病原屬級分類鑒定研究。
產(chǎn)品名稱 | 卟啉單胞菌通用PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014630 |
英文名稱 | Porphyromonas spp.PCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
裂解口腔拭子內(nèi)所有細菌，提取總基因組 DNA 作為擴增模板。
引物靶向卟啉單胞菌屬 16S rRNA 保守區(qū)段，可檢測屬內(nèi)多種卟啉單胞菌。
熒光擴增陽性提示樣本含有卟啉單胞菌屬細菌，適用于廣譜篩查。
?操作步驟?：
（一）反應(yīng)體系配制（冰上操作，防酶失活與污染）
按 “水→緩沖液→dNTP→引物→模板→Taq 酶” 順序加樣（酶最后加，避免失活）。
輕輕渦旋混勻，短暫離心（3000rpm，10s），使液體沉至管底。
無熱蓋的 PCR 儀：加 1 滴礦物油覆蓋液面，防止蒸發(fā)。
（二）PCR 程序設(shè)置（標準 35 循環(huán)）
預(yù)變性：94℃，3-5min（徹底變性模板 DNA）。
循環(huán)階段（35 次）：
變性：94℃，30s（雙鏈解鏈）。
退火：55-65℃，30s（引物結(jié)合模板，按引物 Tm 值調(diào)整）。
延伸：72℃，1min/kb（Taq 酶合成新鏈，1kb 片段約 1min）。
終延伸：72℃，5-10min（確保片段完整延伸）。
保溫：4℃，∞（防止非特異性復(fù)性，短期保存）。
（三）產(chǎn)物檢測（瓊脂糖凝膠電泳）
制膠：1% 瓊脂糖凝膠（1g 瓊脂糖 + 100mL 1×TAE 緩沖液），加熱融化后加核酸染料，倒膠插梳，凝固 30min。
上樣：取 5μL PCR 產(chǎn)物 + 1μL 上樣緩沖液，點樣；同時加 DNA Marker（分子量對照）。
電泳：120V，20-30min，至溴酚藍遷移至凝膠 2/3 處。
成像：凝膠成像系統(tǒng)觀察條帶，目標片段位置與預(yù)期一致則為陽性。
四、參數(shù)優(yōu)化
退火溫度（Tm）：引物 Tm 值 = 4×(G+C)+2×(A+T)，退火溫度一般低于 Tm 值 5℃，溫度過高無條帶，過低非特異性條帶多。
Mg2?濃度：1.5-2.5mM，濃度過低酶活性低、產(chǎn)量少；過高非特異性擴增增加。
循環(huán)數(shù)：25-35 個循環(huán)，少于 25 個產(chǎn)物不足，多于 35 個易出現(xiàn)非特異性條帶。
延伸時間：按目標片段長度調(diào)整，≤1kb 用 1min，1-3kb 用 2-3min。
?注意事項?：
試劑禁止反復(fù)凍融，分裝為小體積 - 20℃保存，融化后冰上放置不超過 2 h
所有耗材必須無 DNase/RNase，吸頭一次性使用，廢液、廢棄 PCR 管 121℃高壓滅菌后丟棄
陽性質(zhì)粒高拷貝，開蓋全程在生物安全柜操作，防止氣溶膠污染實驗室
試劑盒僅限科研檢測，禁止人、臨床樣本檢測
試劑盒過期、試劑渾濁、變色禁止使用
若大量樣本出現(xiàn)陰性對照帶污染，立即更換全新試劑盒，徹底紫外消毒實驗臺面、移液器
公司正在出售的產(chǎn)品：
殺蠣包拉米蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 | 瓜納圖巴病毒PCR檢測試劑盒 | 人磷酸化蛋白激酶B(P-PKB)ELISA檢測試劑盒 |
沙門氏菌invA 基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法) | 馬皮疽組織胞漿菌PCR檢測試劑盒 | 人抗SSA/Ro抗體 ELISA檢測試劑盒 |
沙眼衣原體探針法熒光定量PCR試劑盒 | 禽流感病毒H3N2（AIV-H3N2）檢測試劑盒（雙重?zé)晒釶CR法） | 人抗鏈激酶(SK)抗體檢測試劑盒elisa |
山羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 | 賈第蟲通用PCR檢測試劑盒 | 人硫氧還蛋白依賴性過氧化物還原酶，線粒體(PRDX3)ELISA檢測試劑盒 |
鼠痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 | 單孢子蟲通用PCR檢測試劑盒 | 人硫氧還蛋白,線粒體(TXN2)ELISA試劑盒 |
石膏樣小孢子菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 螺桿菌通用PCR檢測試劑盒 | 人磷酸葡萄糖酸脫氫酶(PGD)ELISA檢測試劑盒 |
嗜麥芽窄食單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 似血矛線蟲PCR檢測試劑盒 | 卟啉單胞菌通用PCR檢測試劑盒人硫氧還蛋白域包含蛋白6(TXNDC6)試劑盒ELISA |
嗜血桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒 | 丙型肝炎病毒5型PCR檢測試劑盒 | 人類風(fēng)濕因子(RF)抗體(IgG)ELISA檢測試劑盒 |
圣保羅沙門氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 丙型肝炎病毒PCR檢測試劑盒 | 人抗尾狀核(CN)自身抗體檢測試劑盒elisa |
關(guān)鍵字： 卟啉單胞菌通用;PCR檢測試劑盒;
上海研生實業(yè)有限公司成立于2011年專業(yè)銷售各種科學(xué)實驗產(chǎn)品，包括分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、等多個研究及應(yīng)用領(lǐng)域。旗下有“上研生"品牌。
我們努力將歐美進口品牌的產(chǎn)品推薦給各類研究人員；另一方面也非常重視國內(nèi)科研市場的產(chǎn)品開發(fā)，推出了一系列具有競爭力的產(chǎn)品和服務(wù)。
同時國家對于生物行業(yè)的發(fā)展給予極大的重視，更多地側(cè)重于科研的投入。公司的服務(wù)和業(yè)務(wù)在同行獲得認可。也具備豐富的管理經(jīng)驗，同時我們建立了集技術(shù)支持、售后服務(wù)等多方位的服務(wù)體系。我們有激情、有理想，更有責(zé)任感，是您科研道路上值得信賴的伙伴。
公司的理念是：以誠信為本，努力打造優(yōu)質(zhì)品牌，為您提供產(chǎn)品的售中、售后服務(wù)。