?產(chǎn)品名稱(chēng):類(lèi)志賀鄰單胞菌PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Plesiomonas shigelloidesPCR
貨號(hào):YS-P014601
分類(lèi):PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格?:50T/盒
檢測(cè)原理:
提取樣本細(xì)菌基因組 DNA,靶向類(lèi)志賀鄰單胞菌特有毒力基因設(shè)計(jì)特異性引物。
嚴(yán)格擴(kuò)增條件避免與鄰單胞菌屬其他菌種交叉反應(yīng),僅擴(kuò)增目標(biāo)菌片段。
檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物判定樣本是否檢出類(lèi)志賀鄰單胞菌。
實(shí)驗(yàn)流程:
1. DNA提?。颖局苽鋮^(qū))
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA,建議濃度≥10 ng/μL,A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備(獨(dú)立操作區(qū))
標(biāo)記6管為梯度稀釋點(diǎn)(如7-2),每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽(yáng)性對(duì)照依次稀釋?zhuān)靹蚝笞鳛闃?biāo)準(zhǔn)品(避免污染)。
3. PCR反應(yīng)體系配制(試劑配制區(qū))
按以下比例配制(示例):
| 組分 | 體積(μL) |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機(jī)檢測(cè)
程序設(shè)置:預(yù)變性95℃ 3 min;40循環(huán)(95℃ 10 s, 60℃ 30 s);熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析:根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
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注意事項(xiàng):
試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板,操作全程佩戴手套、口罩,陽(yáng)性模板僅在生物安全柜開(kāi)蓋;
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實(shí)驗(yàn)后 121℃高壓滅菌再丟棄;
試劑避免反復(fù)凍融,單次融化冰上放置不超過(guò) 2 h,使用完畢立即放回 - 20℃;
移液器吸頭一次性使用,禁止重復(fù)吸取,防止交叉污染;
試劑盒僅用于科研檢測(cè),嚴(yán)禁人臨床體外診斷;
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū),防止氣溶膠大面積污染實(shí)驗(yàn)室;
若陰性對(duì)照持續(xù)出現(xiàn)雜帶,全部更換全新試劑盒,實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、移液器紫外過(guò)夜消毒。
關(guān)鍵字: 類(lèi)志賀鄰單胞菌;PCR檢測(cè)試劑盒;
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