細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子單克隆抗體
原理特點(diǎn)
特異性識(shí)別NF-κB p65亞基單一表位。NF-κB是炎癥和免疫反應(yīng)的核心轉(zhuǎn)錄因子，在靜息狀態(tài)下被IκB抑制在胞質(zhì)，受刺激后轉(zhuǎn)位入核啟動(dòng)靶基因轉(zhuǎn)錄。該單抗用于精準(zhǔn)檢測(cè)NF-κB活化狀態(tài)，是炎癥信號(hào)研究的基石試劑。
英文名稱:NFKB p65 Mouse mAb
中文名稱:細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子單克隆抗體
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:TF65_HUMAN; Transcription factor p65; RELA; Nuclear factor NF-kappa-B p65 subunit; Nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells 3; NFKB3; RELA proto-oncogene, NF-kB subunit; p65; CMCU; NFKB3; AIF3BL3; NF-kB p65/RelA; NFκB-p65; NFκB p65; NF κB-p65; NFκBp65;
交叉反應(yīng):Human,Mouse,Rat
抗體來源:Mouse
免疫原:Recombinant human NFKB p65 Protein
亞型:IgG1
性狀:Size : 50ul/100ul/200ul LiquidSize : 200ug (PBS only) Lyophilized Note: Centrifuge tubes before opening. Reconstitute the lyophilized product in distilled water. Optimal concentration should be determined by the end user.
純化方法:affinity purified by Protein G
克隆類型:Monoclonal
克隆號(hào)：7G6
理論分子量：61 kDa
濃度：1mg/ml
儲(chǔ)存液：Size : 50ul/100ul/200ul0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.Size : 200ug (PBS only)0.01M PBS
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項(xiàng)：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點(diǎn)背景
NF-κB 是多亞基轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，靜息時(shí)結(jié)合 IκB 滯留胞質(zhì)；刺激后 IκB 降解，p65 入核啟動(dòng)數(shù)百促炎、增殖、抗凋亡基因。
單抗特異性識(shí)別 p65 活性亞基，精準(zhǔn)標(biāo)記活化入核 NF-κB，區(qū)分總蛋白與激活型蛋白。
炎癥、感染、腫瘤、自身免疫病通路持續(xù)激活，是炎癥通路黃金檢測(cè)標(biāo)志物，單抗適合高特異性定量。
樣本處理與實(shí)驗(yàn)操作
1. Western Blot（免疫印跡）
樣本制備
細(xì)胞樣本：PBS洗滌2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑），冰上裂解30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清，BCA法定量蛋白濃度
組織樣本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，離心后取上清，調(diào)整蛋白濃度至一致
變性處理：加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘，冷卻后上樣
抗體孵育
轉(zhuǎn)膜完成后，用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時(shí)
一抗稀釋后4℃孵育過夜（12-16小時(shí)），或室溫孵育1-2小時(shí)；孵育時(shí)保證膜完全浸沒在抗體溶液中
TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；加入二抗（1:5000-1:10000稀釋）室溫孵育1-2小時(shí)
再次洗滌后，用ECL發(fā)光液顯影，通過凝膠成像系統(tǒng)采集圖像
2. IHC-P（石蠟切片免疫組化）
樣本前處理
脫蠟水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分鐘），最后用PBS沖洗
抗原修復(fù)：將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰，保持10-15分鐘，自然冷卻至室溫
封閉處理：3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過氧化物酶，PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在切片上，4℃孵育過夜；孵育時(shí)置于濕盒中，防止液體揮發(fā)
次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入二抗（生物素標(biāo)記）室溫孵育30分鐘
PBS沖洗后，加入ABC復(fù)合物室溫孵育30分鐘，DAB顯色劑顯色（顯微鏡下觀察控制時(shí)間，通常3-10分鐘），蘇木素復(fù)染后脫水封片
3. ICC/IF（細(xì)胞免疫熒光）
樣本制備
細(xì)胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度，PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定15-20分鐘
通透處理（根據(jù)抗體類型選擇）：0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次
封閉處理：5% BSA室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結(jié)合
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在爬片上，4℃孵育過夜，或室溫孵育1-2小時(shí)
PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入熒光標(biāo)記二抗（1:200-1:500稀釋），室溫避光孵育30-60分鐘
再次沖洗后，用抗淬滅封片液封片，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像
4. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）
包被與封閉
用包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液pH9.6）稀釋抗原至合適濃度，每孔加入100μl，4℃包被過夜
棄去包被液，PBST洗滌3次，每次3分鐘；加入封閉液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小時(shí)
抗體孵育
一抗按比例稀釋后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小時(shí)，或4℃孵育過夜
PBST洗滌3次，加入稀釋好的酶標(biāo)二抗，每孔100μl，37℃孵育1小時(shí)
洗滌后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光顯色10-20分鐘，加入終止液（2M H?SO?），用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)讀取OD值
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關(guān)鍵字： 細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子單克隆抗體;Mouse;61 kDa;
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