本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA核心檢測(cè)原理，酶標(biāo)板微孔預(yù)先包被抗大鼠LIFR特異性抗體作為捕獲抗體，加入待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品后，樣本中的LIFR抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗板去除游離雜質(zhì)與未結(jié)合蛋白，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體形成免疫夾心結(jié)構(gòu)，底物顯色后顏色深淺對(duì)應(yīng)LIFR濃度高低，終止反應(yīng)后上機(jī)讀數(shù)，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線完成定量分析。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒
英文名稱：LIFR ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E1432
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè)濃度≤1.5pg/mL
檢測(cè)范圍：4pg/mL - 950pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：總時(shí)長(zhǎng)4小時(shí)
保存條件：2-8℃避光密封保存，嚴(yán)禁冷凍試劑
有效期：未開(kāi)封6個(gè)月，開(kāi)封后1個(gè)月用完
顯色系統(tǒng)：穩(wěn)定型TMB-HRP顯色系統(tǒng)
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm單一精準(zhǔn)波長(zhǎng)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：7梯度標(biāo)準(zhǔn)品，四參數(shù)Logistic擬合
特異性：特異性結(jié)合大鼠LIF受體，不識(shí)別LIF配體及其他細(xì)胞因子受體
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤7.8%，板間CV≤9.8%
注意事項(xiàng)：受體蛋白易失活，樣本需低溫保存；試劑平衡室溫后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見(jiàn)光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對(duì)照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
LIFR 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶配制梯度，試劑盒室溫平衡 30min，排布酶標(biāo)板孔位；
標(biāo)準(zhǔn)孔加 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔加入大鼠細(xì)胞勻漿上清 50μL，空白孔加稀釋液；
快速加入 100μL 酶標(biāo)記抗 LIFR 抗體，密封酶標(biāo)板；
37℃恒溫孵育 68min，一步完成樣本抗原與標(biāo)記抗體結(jié)合；
洗滌液浸泡微孔 35s，徹底拍干，重復(fù)洗滌 6 次；
避光加入顯色底物 A、B 各 50μL，37℃避光反應(yīng) 15min；
終止液終止顯色，450nm 測(cè) OD 值，對(duì)照曲線計(jì)算 LIFR 濃度。
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關(guān)鍵字： 大鼠白血病抑制因子受體;LIFR;ELISA試劑盒;
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