雙抗體夾心 ELISA，固相載體包被 PⅠCP 捕獲抗體，樣本中 Ⅰ 型前膠原羧基端肽特異性結(jié)合板底，酶標檢測抗體結(jié)合靶抗原，洗板后底物顯色，吸光度數(shù)值反映樣本 PⅠCP 濃度，用于膠原合成水平檢測。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測限0.21ng/mL，膠原合成標志物專屬檢測

檢測范圍：0.42ng/mL - 42ng/mL

反應時間：總時長95分鐘，樣本孵育65分鐘，二抗孵育30分鐘

保存條件：2-8℃避光保存，所有試劑禁止冷凍暴曬

有效期：未開封原裝6個月有效期

顯色系統(tǒng)：穩(wěn)定型TMB顯色底物，顯色梯度規(guī)整

檢測波長：450nm主波長檢測

標準曲線繪制：6梯度標準品，四參數(shù)擬合，R2≥0.996

特異性：特異性識別PⅠCP，與其他亞型膠原端肽無交叉反應

重復性：板內(nèi)CV≤4.8%，板間CV≤6.8%

注意事項：樣本新鮮制備，避免反復凍融；孵育溫度恒定37℃，保證抗原抗體結(jié)合效率
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑平衡：試劑室溫放置 23min，濃縮洗滌液 1:20 稀釋，組織上清室溫回暖。

標準品稀釋：PⅠCP 標準品溶解梯度稀釋 6 濃度，空白孔僅加稀釋液。

加樣孵育：50μL 標準品 / 樣本 + 50μL HRP 酶抗體，封膜 37℃避光孵育 58min。

洗板操作：洗滌液浸泡 30s，拍干，洗板 5 次。

底物顯色：底物 A、B 各 50μL，避光孵育 13min。

終止讀數(shù)：終止液混勻，8min 內(nèi)檢測 OD450。

數(shù)據(jù)計算：曲線定量 PⅠCP，評估組織膠原合成代謝。