雙抗體夾心 ELISA，微孔板預(yù)包被抗大鼠 BAX 捕獲抗體，樣本凋亡蛋白 BAX 結(jié)合固相載體，加入酶標(biāo)記檢測(cè)抗體形成夾心免疫復(fù)合物，洗滌去除游離組分后顯色讀數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 BAX 表達(dá)水平。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測(cè)濃度0.15ng/mL，凋亡蛋白精準(zhǔn)檢測(cè)

檢測(cè)范圍：0.3ng/mL - 30ng/mL

反應(yīng)時(shí)間：總時(shí)長(zhǎng)95分鐘，樣本孵育65分鐘，二抗孵育30分鐘

保存條件：2-8℃避光保存，蛋白試劑禁止反復(fù)凍融

有效期：未開(kāi)封原裝6個(gè)月有效

顯色系統(tǒng)：穩(wěn)定型TMB顯色體系，細(xì)胞蛋白檢測(cè)適配性高

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm主波長(zhǎng)檢測(cè)

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：6濃度梯度，四參數(shù)擬合，R2≥0.996

特異性：特異性識(shí)別BAX蛋白，與Bcl-2家族其他蛋白無(wú)交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤4.8%，板間CV≤6.8%

注意事項(xiàng)：細(xì)胞、組織樣本充分裂解，提取完整蛋白；避免蛋白高溫變性，保證抗原活性
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見(jiàn) 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說(shuō)明書(shū)梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

試劑平衡：全套試劑室溫平衡 30min，20 倍濃縮洗滌液稀釋，細(xì)胞裂解上清冰上回暖。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：BAX 標(biāo)準(zhǔn)品溶解梯度稀釋 6 梯度，空白孔僅加稀釋液。

加樣孵育：每孔 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品 / 樣本，酶結(jié)合物 50μL，37℃避光孵育 65min。

洗板操作：洗滌液浸泡 35s，徹底拍干，洗板 6 次。

底物顯色：底物 A、B 各 50μL，避光孵育 17min。

終止讀數(shù)：終止液混勻，10min 內(nèi) 450nm 讀數(shù)。

數(shù)據(jù)計(jì)算：定量促凋亡蛋白 BAX，評(píng)估細(xì)胞凋亡程度。