本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，預(yù)先將純化的大鼠MMP-13特異性抗體包被于酶標(biāo)板微孔內(nèi)，形成固相抗體。實(shí)驗(yàn)中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)大鼠樣本，樣本中的MMP-13抗原可與固相抗體特異性結(jié)合，充分洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的免疫復(fù)合物。再次洗滌洗去游離酶標(biāo)抗體后，加入底物顯色液進(jìn)行顯色反應(yīng)，在酶的催化下底物產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，加入終止液終止反應(yīng)后溶液變?yōu)辄S色。最終通過酶標(biāo)儀測(cè)定450nm波長(zhǎng)下各孔吸光度（OD值），OD值與樣本中大鼠MMP-???
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測(cè)濃度≤0.1ng/mL

檢測(cè)范圍：0.2ng/mL - 8ng/mL

反應(yīng)時(shí)間：總反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)120min（包被結(jié)合60min、洗滌后酶促反應(yīng)30min、顯色反應(yīng)30min）

保存條件：試劑盒整體2-8℃冷藏保存，嚴(yán)禁冷凍；開封后試劑密封避光存放

有效期：未開封原裝試劑盒12個(gè)月

顯色系統(tǒng)：TMB底物顯色系統(tǒng)，過氧化氫為氧化劑

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm（主波長(zhǎng)），630nm（參比波長(zhǎng)）

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值為縱坐標(biāo)，采用四參數(shù)Logistic擬合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本含量

特異性：特異性識(shí)別大鼠MMP-13，與大鼠MMP家族其他亞型及同源蛋白無交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)CV≤8%，板間變異系數(shù)CV≤10%

注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)所有耗材需無酶無菌，樣本避免反復(fù)凍融；顯色時(shí)間需嚴(yán)格統(tǒng)一，避光操作；洗滌需充分，避免非特異性吸附影響結(jié)果
試劑盒組成：

預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物

標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測(cè)依據(jù)

生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點(diǎn)

辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化

終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果

濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)

封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

試劑盒室溫平衡 30min，配制洗滌液、樣本稀釋液、酶結(jié)合工作液，取出預(yù)包被酶標(biāo)板條。

設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔依次加入梯度稀釋 MMP-13 標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加入稀釋后待測(cè)樣本 50μL，空白孔加等量樣本稀釋液。

每孔即刻加入酶標(biāo)記結(jié)合液 100μL，封板膜密封酶標(biāo)板，37℃恒溫孵育 60min。

揭去封板膜，棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌洗滌液，浸泡 30s 后甩干，重復(fù)洗板 5 次，拍干板內(nèi)殘留液體。

每孔依次加入顯色液 A 液、顯色液 B 液各 50μL，輕柔震蕩混勻，避光 37℃顯色 15min。

每孔快速加入終止液 50μL 終止顯色反應(yīng)，輕微震蕩混勻。

酶標(biāo)儀設(shè)置 450nm 波長(zhǎng)，15min 內(nèi)讀取各孔 OD 值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品曲線計(jì)算樣本 MMP-13 濃度。