本試劑盒采用特異性雙抗體夾心ELISA原理，酶標(biāo)板微孔預(yù)先固定純化的大鼠MMP-4捕獲抗體。孵育過程中，標(biāo)準(zhǔn)品及待測大鼠樣本中的MMP-4抗原與固相捕獲抗體特異性結(jié)合，洗滌去除游離雜質(zhì)后，加入酶標(biāo)記檢測抗體與抗原結(jié)合，形成穩(wěn)定的免疫復(fù)合物。隨后加入底物顯色體系，在辣根過氧化物酶作用下發(fā)生顯色反應(yīng)，終止反應(yīng)后測定450nm吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度梯度與對應(yīng)OD值構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可準(zhǔn)確計(jì)算出待測大鼠樣本中MMP-4蛋白的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E1437 |
英文名稱 | MMP-4 ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢測濃度≤0.1ng/mL
檢測范圍：0.2ng/mL - 7.5ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：總反應(yīng)時(shí)長130min（樣本孵育70min、酶孵育30min、顯色30min）
保存條件：2-8℃避光冷藏，洗滌液、底物液分開存放，防止污染
有效期：原裝未開封12個(gè)月
顯色系統(tǒng)：優(yōu)化型TMB顯色系統(tǒng)，顯色均勻穩(wěn)定
檢測波長：450nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：梯度標(biāo)準(zhǔn)品上機(jī)檢測，以濃度-OD值擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，R2≥0.990
特異性：特異性結(jié)合大鼠MMP-4，與MMP家族其他亞型無交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤8%，板間CV≤11%
注意事項(xiàng)：孵育過程需密封保濕，避免孔內(nèi)液體蒸發(fā)；廢棄試劑按生物危險(xiǎn)品規(guī)范處理
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
試劑盒常溫平衡 32min，配制洗滌工作液，逐級稀釋 MMP-4 凍干標(biāo)準(zhǔn)品，分裝酶標(biāo)板條備用。
區(qū)分空白、標(biāo)品、樣本孔，標(biāo)品孔加對應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔上樣待測液 50μL，空白孔加稀釋液。
每孔加入酶結(jié)合物 100μL，密封酶標(biāo)板，37℃孵育 65min。
洗板操作：棄液→注滿洗滌液靜置 30s→甩干，重復(fù) 5 輪，板孔倒扣拍干余液。
避光加入顯色 A、B 液各 50μL，37℃避光孵育顯色 16min。
加入終止液 50μL 混勻終止反應(yīng)。
酶標(biāo)儀 450nm 讀數(shù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本 MMP-4 含量。
關(guān)鍵字： 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶4;MMP-4;ELISA試劑盒;
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