本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測原理，酶標板包被大鼠CA125特異性單克隆抗體，待測大鼠樣本及標準品中的CA125抗原與固相抗體特異性結(jié)合，加入酶標記二抗形成免疫復(fù)合物，催化底物顯色，顏色深淺對應(yīng)CA125含量高低，通過酶標儀讀數(shù)及標準曲線換算，實現(xiàn)CA125的定量檢測。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠卵巢癌標志物CA125ELISA試劑盒
英文名稱：ovarian cancer marker-CA125 ELISA Kit
貨號：Y-E1357
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測濃度≤0.5U/mL
檢測范圍：2U/mL - 100U/mL
反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長150min
保存條件：2-8℃避光密封保存，標準品開封后一次性使用，避免失效
有效期：未開封有效期6個月
顯色系統(tǒng)：高靈敏度TMB免疫顯色體系
檢測波長：450nm波長檢測
標準曲線繪制：梯度CA125標準品檢測，擬合標準曲線，精準定量血清樣本含量
特異性：特異性識別大鼠CA125抗原，與其他腫瘤標志物無交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV＜8%，板間CV＜10%
注意事項：血清樣本無溶血、脂血，避免干擾標志物檢測；樣本稀釋精準，嚴格遵循說明書比例；溫育溫度恒定，保證免疫結(jié)合效率
通用注意事項：
樣本要求
血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。
儲存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實驗步驟如下：
微孔板每孔加入梯度標準品 50μL，大鼠腹腔積液 / 血清樣本 50μL，設(shè)置空白對照孔。
每孔加入酶標二抗工作液 103μL，封板封口，37℃孵育 66min。
棄液后洗滌液注滿微孔靜置 29s，拍干，循環(huán)洗板 5 次。
避光加入顯色底物 A、B 各 50μL，混勻，室溫避光顯色 16min。
每孔添加終止液 50μL 終止顯色，混勻微孔板。
酶標儀 450nm 讀取各孔 OD 值，記錄全部檢測數(shù)據(jù)。
繪制標準曲線計算 CA125 濃度，高于曲線上限樣本做梯度稀釋檢測。
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關(guān)鍵字： 大鼠卵巢癌標志物;CA125;ELISA試劑盒;
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