本試劑盒采用廣譜特異性雙抗體夾心ELISA檢測原理，酶標(biāo)板包被人胃癌標(biāo)志物特異性識別抗體，可特異性捕獲樣本中的胃癌相關(guān)標(biāo)志物抗原，孵育結(jié)合后洗除未結(jié)合雜質(zhì)，加入酶標(biāo)記二抗形成穩(wěn)定免疫復(fù)合物，經(jīng)洗滌后加入顯色底物進(jìn)行酶促顯色，終止反應(yīng)后檢測吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線可定量檢測樣本中胃癌標(biāo)志物的表達(dá)水平，為相關(guān)檢測提供數(shù)據(jù)支撐。
基本參數(shù)?：

產(chǎn)品名稱：人胃癌標(biāo)志物ELISA試劑盒

英文名稱：gastric carcinoma Marker   Elisa Kit
貨號：Y-E318

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：綜合檢出限≤0.1U/mL

檢測范圍：1.2～55U/mL

反應(yīng)時(shí)間：樣本溫育 66min，二抗 47min，顯色 15min

保存條件：試劑盒 2～8℃，稀釋好的工作液當(dāng)日使用完畢

顯色系統(tǒng)：增強(qiáng)型 TMB 顯色底物，硫酸終止

檢測波長：450nm+650nm 雙波長檢測

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：5 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)濃度點(diǎn)，線性回歸建立計(jì)算公式

注意事項(xiàng)：胃炎、胃潰瘍樣本易出現(xiàn)假陽性，需結(jié)合臨床指標(biāo)判定
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：

試劑盒室溫靜置 35min，多靶點(diǎn)胃癌標(biāo)志物復(fù)合包被板棄孔內(nèi)液體，洗板 1 次后拍干微孔。

排布孔位：空白孔、混合標(biāo)準(zhǔn)品梯度孔、血清待測樣本孔；標(biāo)準(zhǔn)品孔加入標(biāo)志物混合標(biāo)準(zhǔn)品 60μL，樣本孔加入預(yù)處理血清 60μL，空白孔補(bǔ)稀釋液。

每孔加入復(fù)合酶標(biāo)記抗體 60μL，封板封閉，37℃濕盒孵育 75min。

去除封板，傾倒廢液，洗滌液浸泡每孔 40s 棄除，連續(xù)洗板 5 次，用力拍干微孔。

每孔加入顯色混合底物 100μL，避光 37℃顯色 12min。

滴加終止液 50μL 終止顯色，震蕩混勻。

450nm 酶標(biāo)儀檢測數(shù)值，對照標(biāo)準(zhǔn)品判定標(biāo)志物水平。
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