本試劑盒依托酶聯(lián)免疫雙抗體夾心檢測原理，酶標(biāo)板預(yù)先包被大鼠甲狀腺素（T4）特異性抗體，可特異性結(jié)合樣本中的T4抗原。通過孵育結(jié)合、洗板除雜、酶標(biāo)抗體結(jié)合、底物顯色反應(yīng)后，顯色強度與樣本中T4含量呈正相關(guān)。通過酶標(biāo)儀檢測對應(yīng)吸光度，對照梯度標(biāo)準(zhǔn)曲線，可精準(zhǔn)定量檢測大鼠樣本中甲狀腺素的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測濃度≤5nmol/L

檢測范圍：10nmol/L - 300nmol/L

反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長110min（孵育80min、顯色30min）

保存條件：2-8℃避光保存，激素試劑避免高溫、光照

有效期：原裝未開封12個月

顯色系統(tǒng)：高穩(wěn)定性TMB顯色體系

檢測波長：450nm，630nm校正

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：6點梯度標(biāo)準(zhǔn)品檢測，四參數(shù)擬合曲線，R2≥0.992

特異性：特異性識別大鼠T4，與T3等甲狀腺激素?zé)o交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤6%，板間CV≤8%

注意事項：血清樣本需空腹采集，避免飲食干擾激素水平檢測
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑室溫靜置 27min，配比濃縮洗滌液配成工作液，稀釋 T4 標(biāo)準(zhǔn)品，裁剪所需酶標(biāo)板條。

標(biāo)準(zhǔn)孔加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，大鼠血清樣本孔加稀釋樣本 50μL，空白孔補稀釋液。

每孔加入酶結(jié)合液 100μL，封板 37℃孵育 57min。

洗板 4 次，浸泡 28s 每次，甩干液體拍干板孔。

避光加入顯色 A、B 底物各 50μL，37℃避光顯色 12min。

終止液 50μL 加入各孔混勻終止。

450nm 檢測吸光度，換算樣本甲狀腺素 T4 濃度。