本試劑盒依托雙抗體夾心ELISA檢測原理，微孔板固定純化的大鼠TSH特異性捕獲抗體，加入標(biāo)準(zhǔn)品與待測大鼠樣本后，樣本中的TSH抗原被固相抗體特異性捕獲，洗滌干凈后加入酶標(biāo)記的TSH檢測抗體，形成穩(wěn)定的三元夾心免疫復(fù)合物，底物顯色后根據(jù)吸光度變化，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線精準(zhǔn)檢測樣本中TSH的濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒
英文名稱：TSH ELISA Kit
貨號：Y-E1609
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢出限0.08mIU/L，可精準(zhǔn)檢測大鼠微量甲狀腺調(diào)節(jié)激素水平。
檢測范圍：0.2mIU/L - 15mIU/L，覆蓋大鼠正常及甲狀腺功能異常模型TSH濃度。
反應(yīng)時間：總時長100分鐘，樣本孵育40min、酶孵育30min、顯色25min、終止讀數(shù)5min。
保存條件：2 - 8℃避光保存，底物液、終止液分開存放，避免混合失效。
有效期：原裝未開封有效期6個月，開封后2周內(nèi)使用。
顯色系統(tǒng)：高靈敏甲狀腺激素顯色系統(tǒng)，背景值極低。
檢測波長：450nm標(biāo)準(zhǔn)檢測波長。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：五梯度標(biāo)準(zhǔn)品擬合，四參數(shù)方程，R2≥0.994。
特異性：特異性識別大鼠TSH，與TRH、T3、T4無交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤3.5%，板間CV≤5.5%，數(shù)據(jù)可靠。
注意事項(xiàng)：樣本避免反復(fù)凍融，防止激素分子降解；洗板充分，杜絕非特異性吸附；顯色終止后立即讀數(shù)，防止顏色衰減。
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
TSH 凍干標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋，試劑盒室溫平衡 27min，標(biāo)記酶標(biāo)板孔類型；
標(biāo)準(zhǔn)孔加 50μL 梯度標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔加入大鼠血清 50μL，空白孔填充稀釋液；
快速加入 100μL HRP 標(biāo)記抗 TSH 抗體，密封酶標(biāo)板；
37℃恒溫孵育 59min，一步共孵育免疫結(jié)合；
洗板液浸泡微孔 35s，拍干殘留液體，洗板 5 次；
避光加入顯色底物 A、B 各 50μL，37℃避光反應(yīng) 16min；
終止液終止顯色，450nm 檢測 OD 值，計(jì)算 TSH 含量。
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