本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，微孔板預(yù)先包被大鼠TRH固相抗原，加入待測(cè)樣本和酶標(biāo)抗體工作液后，樣本中的游離TRH抗原與固相抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶標(biāo)抗體，TRH濃度越高，固相結(jié)合的酶標(biāo)抗體越少，顯色反應(yīng)越弱，終止反應(yīng)后檢測(cè)吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線定量測(cè)定大鼠樣本中TRH的含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠促甲狀腺素釋放激素(TRH)ELISA試劑盒
英文名稱(chēng)：TRH ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E1427
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè)值0.05ng/mL，精準(zhǔn)檢測(cè)大鼠下丘腦微量TRH分泌水平。
檢測(cè)范圍：0.1ng/mL - 8ng/mL，適配大鼠下丘腦組織、血清樣本檢測(cè)。
反應(yīng)時(shí)間：總時(shí)長(zhǎng)110分鐘，樣本孵育40min、酶抗體孵育35min、顯色30min、終止讀數(shù)5min。
保存條件：2 - 8℃密封避光冷藏，標(biāo)準(zhǔn)品干粉低溫保存，溶解后現(xiàn)配現(xiàn)用。
有效期：未開(kāi)封有效期6個(gè)月，開(kāi)封后1個(gè)月內(nèi)用完。
顯色系統(tǒng)：神經(jīng)激素專(zhuān)用TMB顯色體系，顯色穩(wěn)定無(wú)衰減。
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm主波長(zhǎng)，620nm參比波長(zhǎng)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：六梯度標(biāo)準(zhǔn)品，四參數(shù)擬合，R2≥0.996。
特異性：特異性結(jié)合大鼠TRH，與其他下丘腦釋放激素?zé)o交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤3%，板間CV≤5%，重復(fù)性優(yōu)異。
注意事項(xiàng)：下丘腦組織樣本需快速低溫裂解，防止TRH降解；實(shí)驗(yàn)全程避光、恒溫；移液精準(zhǔn)，減少系統(tǒng)誤差。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋?zhuān)ǔＲ?jiàn) 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋?zhuān)?/span>
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說(shuō)明書(shū)梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋?zhuān)瑴啙針颖?12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
TRH 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋配制濃度梯度，試劑盒室溫平衡 32min，劃分酶標(biāo)板孔位；
各微孔添加 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品或大鼠下丘腦組織上清，空白孔補(bǔ)稀釋緩沖液；
全部微孔加入 100μL 酶標(biāo)記抗 TRH 檢測(cè)抗體，封板膜密封；
37℃避光孵育 68min，一步同步結(jié)合抗原與標(biāo)記抗體；
洗滌液浸泡微孔 40s，徹底拍干，重復(fù)洗滌 6 次；
避光添加顯色底物混合液 100μL，37℃避光顯色 13min；
終止液混勻，450nm 讀取吸光度，換算 TRH 濃度。
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