本試劑盒基于競爭法ELISA檢測原理,本試劑盒將純化的大鼠GC抗原包被于酶標板,待測樣本中的內(nèi)源性GC與固相GC抗原競爭結(jié)合限量的酶標記特異性抗體,樣本中GC含量越高,結(jié)合在固相上的酶標抗體越少,底物顯色越淺,通過檢測吸光度數(shù)值,結(jié)合競爭法標準曲線,定量檢測大鼠樣本中GC的濃度。
基本參數(shù)?:

產(chǎn)品名稱:大鼠內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素(GC)ELISA試劑盒
英文名稱:GC ELISA Kit
貨號:Y-E1059
規(guī)格:48T/96T
靈敏度:最低檢測值≤0.3ng/mL,可精準檢出大鼠體內(nèi)微量內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素基礎(chǔ)表達水平。
檢測范圍:0.5ng/mL - 50ng/mL,覆蓋大鼠生理、病理狀態(tài)下GC的濃度波動范圍。
反應時間:總實驗時長110分鐘,樣本孵育40分鐘,酶標抗體孵育30分鐘,顯色25分鐘,終止讀數(shù)15分鐘。
保存條件:試劑盒2-8℃避光保存,標準品、濃縮抗體需單獨密封存放,禁止冷凍,防止蛋白變性失活。
有效期:未開封試劑盒有效期6個月,恒溫恒濕條件下存放性能穩(wěn)定。
顯色系統(tǒng):優(yōu)化型TMB雙組分顯色體系,顯色反應溫和穩(wěn)定,不易過曝,高低濃度顯色梯度分明。
檢測波長:標準檢測波長450nm,參比波長630nm,雙波長校正提升微量樣本檢測準確率。
標準曲線繪制:采用四參數(shù)Logistic回歸擬合標準曲線,R2≥0.990,適配高低濃度樣本精準定量。
特異性:特異性結(jié)合大鼠GC,與皮質(zhì)醇、醛固酮等其他甾體激素無明顯交叉反應,檢測特異性達標。
重復性:板內(nèi)變異系數(shù)≤8%,板間變異系數(shù)≤10%,批次檢測重復性良好。
注意事項:樣本采集后盡快分離上清,避免激素降解;實驗全程避光操作,防止顯色試劑氧化;嚴格把控孵育溫度,偏差不超過±1℃。
試劑盒組成:

預包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原,結(jié)合目標物
標準品 6支/套 制備標準曲線,定量檢測依據(jù)
生物素標記抗體/抗原 1瓶 識別并結(jié)合目標物,提供酶結(jié)合位點
辣根過氧化物酶(HRP)標記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合,催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應底物,產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應,穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板,去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
實驗步驟如下:

無激素污染微孔板每孔加梯度標準品 48μL,大鼠血清樣本 48μL,空白對照孔設(shè)稀釋液。
每孔加入特異性酶標二抗 101μL,封板避光,37℃孵育 68min。
棄凈孔內(nèi)液體,洗滌液浸泡 32s,拍干,循環(huán)洗板 5 次。
避光加入顯色底物 A、B 各 50μL,混勻后暗處顯色 14min。
加入終止液 50μL 終止酶促反應,橫向搖晃微孔板混勻。
酶標儀 450nm 讀取 OD 值,避免激素交叉干擾。
曲線換算糖皮質(zhì)激素濃度,判定機體內(nèi)源激素分泌水平。
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