本試劑盒采用競爭抑制ELISA檢測原理,微孔板預先包被3-硝基酪氨酸人工抗原,檢測體系中加入標準品、待測樣本和定量的3-NT特異性抗體,樣本中的3-NT抗原與板上固相抗原競爭結合有限的抗體結合位點,孵育反應后洗滌去除未結合反應物,加入酶標記二抗進行結合反應,再次洗滌后加入TMB底物顯色,樣本中3-NT含量越高,競爭結合的抗體越多,板上結合的抗體越少,顯色越淺,即吸光度值與3-NT濃度呈負相關,通過標準曲線擬合即可定量檢測樣本中3-硝基酪氨酸的含量。
基本參數(shù)?:

產(chǎn)品名稱:人3-硝基酪氨酸(3-NT)ELISA試劑盒
英文名稱:3-NT Elisa Kit
貨號:Y-E764
規(guī)格:48T/96T
靈敏度:最低檢測靈敏度0.1nmol/L,精準檢測氧化應激微量標志物
檢測范圍:0.3nmol/L - 9nmol/L,適配氧化損傷相關樣本檢測
反應時間:完整反應時長90分鐘,快速完成樣本檢測,適配批量實驗
保存條件:試劑盒整體2-8℃避光冷藏,嚴禁冷凍,防止小分子標志物試劑失效
有效期:原裝有效期6個月,開封后1個月內用完,避免試劑氧化失效
特異性:特異性結合3-硝基酪氨酸,與酪氨酸、硝基化其他氨基酸無交叉反應
重復性:板內CV≤7%,板間CV≤9.5%,檢測數(shù)據(jù)波動小
注意事項:樣本采集后需快速低溫保存,避免體外氧化生成干擾物質;實驗全程避光操作,洗板徹底,保證檢測準確性
試劑盒組成:

預包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原,結合目標物
標準品 6支/套 制備標準曲線,定量檢測依據(jù)
生物素標記抗體/抗原 1瓶 識別并結合目標物,提供酶結合位點
辣根過氧化物酶(HRP)標記親和素 1瓶 與生物素結合,催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應底物,產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應,穩(wěn)定顯色結果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板,去除未結合物質
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
實驗步驟如下:

樣本處理:血漿樣本室溫融化,溶血樣本舍棄不用,常規(guī)樣本直接稀釋 1:4 備用;標準品復溶后逐級稀釋 6 個濃度梯度。
加樣布設:空白孔加稀釋液 50μL,各標準孔加入對應濃度標準品 50μL,樣本孔加入稀釋后待測樣品 50μL。
一步共加酶試劑:全部反應孔加入酶標記競爭抗原工作液 100μL,封板封口,搖勻板面。
孵育結合:37℃避光孵育 65min,完成競爭免疫結合反應。
洗板操作:傾倒廢液,洗滌液浸泡每孔 30s,洗板 4 次,吸水紙吸干孔內水分。
底物顯色:加入顯色混合液 100μL,37℃避光顯色 14min。
終止檢測:終止液終止反應,450nm 波長測定吸光度,換算樣本 3-NT 含量。
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關鍵字: 人3-硝基酪氨酸;3-NT;ELISA試劑盒;
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