本試劑盒以雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)為檢測(cè)核心，預(yù)先將大鼠NGAL特異性抗體包被于酶標(biāo)板微孔表面。實(shí)驗(yàn)孵育階段，樣本與標(biāo)準(zhǔn)品中的大鼠NGAL抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除游離物質(zhì)后，加入HRP標(biāo)記的NGAL二抗進(jìn)行孵育，構(gòu)建特異性免疫夾心結(jié)構(gòu)。通過(guò)TMB底物的酶促顯色反應(yīng)產(chǎn)生有色產(chǎn)物，產(chǎn)物吸光度與樣本中NGAL濃度正相關(guān)，終止反應(yīng)后檢測(cè)吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)即可準(zhǔn)確測(cè)定大鼠樣本中NGAL的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測(cè)濃度≤0.5ng/mL

檢測(cè)范圍：1ng/mL - 150ng/mL

反應(yīng)時(shí)間：總反應(yīng)120分鐘（孵育60min、酶結(jié)合30min、顯色30min）

保存條件：2-8℃密封避光保存，原裝試劑未開(kāi)封可長(zhǎng)期穩(wěn)定存放

有效期：12個(gè)月

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制：四參數(shù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，相關(guān)系數(shù)R2≥0.991

注意事項(xiàng)：尿液、血清樣本均可檢測(cè)，渾濁樣本需離心過(guò)濾后使用
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類(lèi)靶標(biāo)樣本見(jiàn)光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

1. 試劑室溫復(fù)溫 30min，配制洗滌工作液，尿液 / 血清樣本低速離心去除沉淀，取出酶標(biāo)板分設(shè)孔位。

2. 梯度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL 加入標(biāo)準(zhǔn)孔，待測(cè)樣本 50μL 加入樣品孔，空白孔添加稀釋緩沖液。

3. 全部孔位加入酶標(biāo)記工作液 100μL，封板膜密封，37℃孵育 68min。

4. 洗板 5 次，每次加滿(mǎn)洗滌液靜置 30s，倒扣甩干，徹底去除未結(jié)合反應(yīng)物。

5. 避光添加顯色液 A、B 各 50μL，輕微震蕩，37℃避光顯色 15min。

6. 滴加終止液 50μL / 孔，混勻終止顯色。

7. 酶標(biāo)儀 450nm 檢測(cè)吸光度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)算出 NGAL 濃度。