本試劑盒以雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)為檢測核心，酶標板微孔預先固定大鼠MHCⅡ特異性抗體。實驗中，樣本與標準品中的大鼠MHCⅡ抗原可與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除游離物質(zhì)后，加入HRP標記的MHCⅡ檢測抗體，完成特異性二次結(jié)合。后續(xù)TMB底物在酶的催化下顯色，顯色強度與樣本中MHCⅡ濃度正相關(guān)，終止反應后檢測吸光度，依據(jù)標準曲線即可準確測定目標復合體含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測濃度≤1.0ng/mL

檢測范圍：2ng/mL - 160ng/mL

反應時間：總反應130分鐘（37℃孵育70min、酶孵育30min、顯色30min）

保存條件：2-8℃密封避光保存，嚴禁冷凍

有效期：12個月

檢測波長：450nm

標準曲線繪制：四參數(shù)擬合標準曲線，R2≥0.991

注意事項：洗板需充分，避免殘留洗液干擾抗原抗體特異性結(jié)合
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

1. 試劑盒組分室溫復溫 30min，稀釋洗滌液，待測樣本避免反復凍融，拆取所需酶標條，其余密封 4℃保存。

2. 標準品孔梯度加樣 50μL MHCⅡ 標準品，樣本孔加入 50μL 待測樣本，空白對照孔補稀釋液。

3. 全部孔加入酶結(jié)合工作液 100μL，封板密封，37℃恒溫孵育 69min。

4. 洗板 4 次，洗滌液浸泡 40s 每一次，甩干板內(nèi)廢液并拍干。

5. 避光加入顯色液 A、B 各 50μL，37℃避光顯色 12min。

6. 滴加終止液 50μL 混勻終止反應。

7. 酶標儀 450nm 讀數(shù)，依據(jù)標準曲線計算 MHCⅡ 含量。