本試劑盒基于雙抗體夾心酶聯免疫吸附原理，酶標板預先包被蝶蛹金小蜂卵黃蛋白原（vtg）特異性捕獲抗體，待測樣本中的vtg抗原與固相抗體特異性免疫結合，洗滌后加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體，形成穩(wěn)定的免疫夾心復合物，酶促底物顯色后的顯色深淺與樣本中vtg含量成正比，結合標準曲線可精準定量蝶蛹金小蜂卵黃蛋白原的表達水平。
產品參數：

?靈敏度：最低檢出濃度0.09ng/mL，適配昆蟲體內微量卵黃蛋白原精準檢測。

檢測范圍：0.18ng/mL - 85ng/mL，覆蓋蝶蛹金小蜂不同發(fā)育階段vtg表達濃度。

反應時間：總實驗時長95分鐘，昆蟲樣本專屬孵育45分鐘，顯色反應20分鐘。

保存條件：2-8℃密封避光保存，昆蟲蛋白檢測試劑需防潮防污染。

有效期：未開封有效期11個月，昆蟲特異性試劑穩(wěn)定性周期略短。

特異性：專一識別蝶蛹金小蜂vtg，與其他昆蟲卵黃蛋白原無交叉反應。

重復性：板內CV≤5%，板間CV≤7%，昆蟲生理實驗數據穩(wěn)定。

注意事項：昆蟲樣本需低溫研磨提取，常溫放置易導致vtg蛋白降解；樣本避免反復凍融。
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結合物、神經遞質 / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結果乘以稀釋倍數；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

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實驗操作流程：

試劑盒提前 30min 回溫，稀釋洗滌液，標記空白、標準、待測樣本孔位。

梯度稀釋 vtg 標準品，昆蟲體液樣本離心取上清稀釋，每孔加 50μL 液體。

所有檢測孔直接加入酶標二抗工作液 100μL，覆膜封板。

37℃避光孵育 60min，固相抗體捕獲靶標蛋白并結合酶標物。

洗板 6 次，每孔加滿洗滌液靜置 30s，倒扣拍干微孔。

避光依次加入顯色 A、B 液各 50μL，混勻后 37℃顯色 15min。

加入終止液終止反應，450nm 測定吸光值，對照標準曲線得出 vtg 含量。