本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附原理，酶標板微孔固定抗人P27蛋白特異性單克隆抗體，加入標準品、細胞裂解液、組織樣本等待測樣品，樣本中的P27周期蛋白與固相抗體特異性結(jié)合，孵育洗滌后加入HRP標記的P27檢測抗體，形成特異性免疫復合物，經(jīng)顯色、終止反應后檢測OD值，通過標準曲線定量測定樣本中P27蛋白的表達水平，反映細胞周期調(diào)控狀態(tài)。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人P27蛋白(P27)ELISA試劑盒
英文名稱：P27 protein Elisa Kit
貨號：Y-E224
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測值0.08ng/mL，適配細胞周期調(diào)控蛋白微量檢測
檢測范圍：0.16ng/mL - 18ng/mL，覆蓋腫瘤、細胞增殖模型樣本區(qū)間
反應時間：實驗總時長90分鐘
保存條件：2-8℃冷藏保存，禁止冷凍，防止蛋白變性
有效期：未開封有效期12個月
特異性：專一識別人P27周期蛋白，無同源調(diào)控蛋白交叉反應
重復性：板內(nèi)變異＜6%，板間變異＜7%
注意事項：細胞樣本充分裂解，去除沉淀雜質(zhì)；樣本避免反復凍融
關(guān)鍵注意事項：
實驗前需仔細閱讀對應試劑盒的說明書，不同試劑盒的孵育時間、加樣量可能存在差異
所有試劑需按要求儲存，未用完的試劑需密封后放回規(guī)定溫度（通常2-8℃或-20℃）
避免試劑污染，不同組分的移液器槍頭需分開使用
洗板時需確保每孔都被洗滌液覆蓋，防止出現(xiàn)假陽性結(jié)果
顯色過程需避光，避免陽光直射影響結(jié)果
實驗步驟如下：
實驗前將試劑盒所有試劑、待測樣本、標準品置于室溫環(huán)境平衡 30min，配制洗滌緩沖液備用，拆封酶標板并預留所需孔位，剩余板條密封冷藏保存。
設置空白孔、標準品梯度孔、待測樣本孔，每孔依次加入對應濃度標準品液、待測樣本液，空白孔添加等量樣本稀釋液，每孔加樣量嚴格統(tǒng)一，封板膜封緊酶標板。
向所有加樣孔內(nèi)直接加入預先稀釋完成的酶結(jié)合工作液，全程一步添加無需棄去孔內(nèi)原有液體，輕輕晃動酶標板混勻孔內(nèi)體系。
封板后放入 37℃恒溫孵育箱避光孵育 60min，孵育過程避免酶標板堆疊、溫度大幅波動。
孵育結(jié)束后撕除封板膜，徹底傾倒孔內(nèi)全部液體，每孔加滿洗滌液浸泡 30s 后甩干，重復洗板 5 次，最后一次洗板后拍干孔內(nèi)殘留液體。
每孔同步加入顯色底物 A 液與顯色底物 B 液，避光 37℃恒溫顯色 15min，觀察標準品孔出現(xiàn)明顯梯度藍色即可終止反應。
每孔加入終止液終止顯色反應，酶標儀調(diào)至 450nm 波長，15min 內(nèi)讀取各孔 OD 吸光度值，根據(jù)標準品曲線計算樣本中 P27 蛋白濃度。
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關(guān)鍵字： 人P27蛋白;P27;ELISA試劑盒;
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