本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測原理，酶標(biāo)板固相包被人促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子特異性抗體，樣本與標(biāo)準(zhǔn)品中的CRF抗原與包被抗體發(fā)生特異性免疫結(jié)合，洗滌除去游離成分后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的CRF二抗形成免疫復(fù)合物，催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，終止顯色后檢測吸光度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度與吸光度對應(yīng)關(guān)系，定量測定樣本中CRF的含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)ELISA試劑盒
英文名稱：CRF Elisa Kit
貨號：Y-E628
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢出限 7pg/mL
檢測范圍：15pg/mL - 600pg/mL
反應(yīng)時間：一抗結(jié)合 90min，酶標(biāo)二抗孵育 45min，避光顯色 20min，全程約 155min
顯色系統(tǒng)：雙組分 A+B TMB 顯色液，2M H?SO?終止
檢測波長：450nm 單波長檢測
特異性：針對 CRF 抗原決定簇專一識別，與 AVP、ACTH 無明顯交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi) CV＜7.5%，板間 CV＜9.0%
注意事項：樣本采集后立即低溫分裝凍存，避免反復(fù)凍融；洗板每孔浸泡 30s 再拍干，防止非特異性吸附
關(guān)鍵注意事項：
本試劑盒僅科研體外檢測，嚴(yán)禁臨床診斷使用。
全程避免試劑、板條強光直射，TMB 見光易失效。
移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無酶、無熱源。
孵育溫度嚴(yán)格控制 37℃，溫度偏低會降低 OD 值、靈敏度下降。
洗板必須充分，殘液會造成非特異性結(jié)合，背景偏高。
終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會漂移，結(jié)果失真。
終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。
實驗廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。
不同批次試劑盒組分不可混用。
試劑盒運輸全程 2～8℃冷鏈，嚴(yán)禁高溫暴曬。
實驗步驟如下：
試劑提前放置室溫 25℃環(huán)境復(fù)溫 25min，拆封酶標(biāo)板條，按需拆取剩余板條密封冷藏留存。
標(biāo)準(zhǔn)品用配套稀釋液梯度配制成 5 組濃度梯度，每孔加入 CRF 標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；待測樣本經(jīng)預(yù)處理稀釋后加樣 50μL 至樣本孔；空白孔僅加稀釋液 50μL。
每孔加入 HRP 標(biāo)記抗 CRF 抗體工作液 100μL，覆膜封板，橫向輕晃酶標(biāo)板 10s 混勻體系。
置于 37℃水浴恒溫箱避光孵育 45min，全程防止封板膜脫落漏液。
手動洗板：每孔注滿洗滌液浸泡 40s，倒扣甩去廢液，重復(fù)洗板 4 次，吸水紙充分拍干微孔。
避光條件下每孔添加顯色底物液 A、B 各 50μL，混勻后 37℃避光反應(yīng) 12min，觀察孔內(nèi)藍(lán)色顯色程度。
加入終止液 50μL 終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀調(diào)至 450nm 讀取吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合換算樣本 CRF 含量。
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關(guān)鍵字： 人促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子;CRF;ELISA試劑盒;
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