本試劑盒采用間接ELISA法檢測人樣本中艾柯病毒IgM(ECHO IgM)抗體。微孔板固相包被純化的艾柯病毒特異性抗原，加入待測樣本后，樣本中的ECHO IgM抗體與固相抗原特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合的無關(guān)成分。隨后加入HRP標(biāo)記的抗人IgM二抗，特異性結(jié)合已固定的靶抗體，再次洗滌后加入TMB底物顯色，酶促反應(yīng)生成穩(wěn)定有色產(chǎn)物。終止反應(yīng)后檢測吸光度，吸光度與樣本中ECHO IgM抗體含量呈正相關(guān)，可實(shí)現(xiàn)對艾柯病毒感染早期抗體的定性與定量檢測。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 人艾柯病毒IgM(ECHO IgM)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E610 |
英文名稱 | ECHO IgM Elisa Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低陽性稀釋度 1:32
檢測范圍：抗體滴度 1:32~1:2048
反應(yīng)時間：樣本溫育 55min，抗人 IgM 酶二抗 40min，顯色 12min
顯色系統(tǒng)：TMB 顯色液
檢測波長：450nm
特異性：與柯薩奇病毒 IgM 無交叉假陽性
重復(fù)性：板內(nèi) CV＜7%，板間 CV＜9%
注意事項(xiàng)：類風(fēng)濕因子陽性血清易出現(xiàn)非特異結(jié)果，建議預(yù)處理樣本
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
試劑盒室溫平衡 35min，取出預(yù)包被酶標(biāo)板，按需截取板條，劃分標(biāo)準(zhǔn)孔、血清樣本孔、空白孔。
標(biāo)準(zhǔn)孔加入梯度稀釋 ECHO IgM 陽性對照標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；樣本孔加入稀釋待測血清 50μL；空白孔不加試劑。
所有非空白孔加入一步法酶標(biāo)記抗人 IgM 結(jié)合液 50μL，震蕩混勻，封板膜嚴(yán)密封口。
37℃恒溫避光孵育 80min，避免強(qiáng)光直射試劑盒。
傾倒廢液，洗板液灌滿微孔浸泡 45s，拍干殘留液體，連續(xù)洗板 6 次。
每孔加入顯色底物 A、B 各 50μL，遮光混勻，37℃避光顯色 22min。
加入終止液 50μL 終止顯色，充分混勻，450nm 波長檢測吸光度，判讀樣本艾柯病毒 IgM 抗體水平。
關(guān)鍵字： 人艾柯病毒IgM;ECHO IgM;ELISA試劑盒;
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