本試劑盒基于抗原抗體特異性結(jié)合與酶促顯色放大原理，采用雙抗體夾心法檢測(cè)人VLA4含量，微孔板固相包被遲現(xiàn)抗原4特異性捕獲抗體，待測(cè)樣本中的VLA4抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌后加入酶標(biāo)檢測(cè)抗體形成穩(wěn)定免疫復(fù)合物，充分反應(yīng)后洗滌去除游離試劑，加入底物顯色，顯色深淺與樣本中VLA4濃度成正比，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量檢測(cè)。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：0.06ng/mL

檢測(cè)范圍：0.18ng/mL–11.52ng/mL

反應(yīng)時(shí)間：110min，樣本 60min，二抗 35min，顯色 15min

顯色系統(tǒng)：HRP-TMB 底物顯色

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm+630nm

特異性：特異性識(shí)別 α4β1 整合素 VLA4，與其他整合素家族分子交叉＜4%

重復(fù)性：板內(nèi) CV＜6.6%，板間 CV＜8.4%

注意事項(xiàng)：淋巴細(xì)胞懸液樣本需離心取上清；試劑盒 2~8℃避光存放。
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

整套試劑盒室溫放置 30min，梯度稀釋 VLA4 標(biāo)準(zhǔn)蛋白，酶標(biāo)板做好孔位標(biāo)記分類。

向微孔加入梯度標(biāo)準(zhǔn)液、細(xì)胞懸液上清待測(cè)樣本、空白稀釋液。

直接加入酶偶聯(lián)檢測(cè)抗體覆膜密封，37℃孵育 70min 一步夾心 ELISA。

棄液后洗板 6 次，浸泡 30s / 次，去除非特異性吸附雜質(zhì)。

顯色液避光室溫顯色 18min。

終止液終止顯色反應(yīng)并混勻液體。

450nm 測(cè)定吸光度，計(jì)算樣本 VLA4 表達(dá)量，歸檔實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。