本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA原理，微孔板預(yù)先包被人巨噬細(xì)胞刺激蛋白特異性捕獲抗體，待測(cè)樣本中的MSP抗原可與固相抗體特異性結(jié)合；孵育洗滌后加入酶標(biāo)記MSP檢測(cè)抗體，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的免疫夾心結(jié)構(gòu)；洗去游離反應(yīng)物后進(jìn)行顯色反應(yīng)，顯色強(qiáng)度與樣本中巨噬細(xì)胞刺激蛋白含量呈正相關(guān)，通過吸光度檢測(cè)和標(biāo)準(zhǔn)曲線換算，實(shí)現(xiàn)靶蛋白的定量檢測(cè)。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人巨噬細(xì)胞刺激蛋白(MSP)ELISA試劑盒
英文名稱：MSP ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E3519
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：檢出下限 2.1ng/L
檢測(cè)范圍：4.2~269ng/L
反應(yīng)時(shí)間：一抗結(jié)合 98min，酶二抗 58min，避光顯色 19min
保存條件：2~8℃冷藏，未開封試劑盒有效期 6 個(gè)月
顯色系統(tǒng)：雙組分 TMB 顯色套裝，臨用配制
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm，620nm 參比波長(zhǎng)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù)非線性擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于精確定量 MSP 含量
注意事項(xiàng)：細(xì)胞上清去除巨噬細(xì)胞沉淀；微孔板不可風(fēng)干；剩余試劑禁止倒回原裝瓶
試劑盒組成：
預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測(cè)依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點(diǎn)
辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒室溫放置 33min，取用酶標(biāo)板，劃分標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、空白孔，每孔添加預(yù)處理稀釋液 100μL，空白孔加稀釋液。
直接向全部孔位加入酶標(biāo)記二抗液 55μL，搖勻后封板膜密封。
37℃恒溫孵育 71min，全程避光操作。
撕除封板膜，棄液后洗板液加滿每孔靜置 30s，拍干，重復(fù)洗板 6 次。
每孔加入顯色 A 液、B 液各 50μL，避光 37℃顯色 19min。
每孔添加終止液 50μL，輕晃酶標(biāo)板混勻終止反應(yīng)。
450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，空白歸零，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到 MSP 蛋白含量。
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關(guān)鍵字： 人巨噬細(xì)胞刺激蛋白;MSP;ELISA試劑盒;
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